Способ моделирования опухоли легкого и устройство для его осуществления

ВЕДОМСТВО ПРИ КАБИНЕТЕ МИНИСТРОВ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАНОтбор на аффинитет к легочной ткани(54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ОПУХОЛИ лвгкогоиустгойство для ЕГО ОСУЩЕствлвния с57 Изобретена относится к медицине и может быть применено при модели ровании опухолей. Цель изобретения повышение избирательности и эффективности образования метастатических опухолей, повышение производительностн устройства и снижена повреждений опухолевых клеток. Цель достигается инъекцией животному внутривенно единичных опухолевых клеток в дозе5 клеток и более. В качестве транспортируемого материала-используют клетки аффнннтетного штамма, который благодаря своей тропностн к легочной ткани с высокой вероятностью об разует метастазы только в легком, А а не в каком-либо другом органе жи вотного Изоляция и инъекция опухоле вых клеток осуществляется устройством представляющим собой стеклянный. капилляр 3, соединенный переходниками 5 и 6 одним концом с поршневой системой 2, другим с инъекционной иглой 4 шприца 1. Именно использование метастазнрующего в легкие.перевиваемого аффинитетного штамма в сочетании с предлагаемым устройством для изоляции и инъекции единичых-клеток. позволяет с высокой эффективностью получать отдельные метастазы в легких лабораторных животных 1 ил.. ментальной онкологии, и может быть применено при моделировании метаста зов легких у лабораторных животных.Цель изобретения - повышение избирательности п-эффективности образования одиночных метасстатических опухолей, а также повыение производительности и сижение повреждений единичных опухолевых клетокНе чертеже изображено устройство для изоляции л инъекцииотдельиыи клеток.Способ осуществляется следующм образомЖивстим-реципиентам трансплантируют аффинитетиый к легким переви ваемый опухолевый штамм путем внутри венной инъекции одиночных опухолевых клеток в дозе 5 клеток иболее. Вводимые через вену единичные опухолевые клетки, попадая с током крови вбольшой круг кровообращения и далее в капиллнры легочной ткани, закрепляются в легком благодаря тропности в этойлевым метастазам, которые затем могут. быть удалены хирургическим путем. Дпносуществления изоляции отдель ных клеток применеы взаимозаменяеые съемные капилляры, причем для введения опухолевых клеток животному-реципиенту капилляр с изолированными единичными клетками присоединяют с одной стороны через селиконовый и стальной- переходники.к инъекционной игле шпри ца, а с другой носредством гибкогокапилляра к поршневой системе, что обеспечивает достаточную жесткость конструкции устройства-и дает возможность осуществлять прокол кожного по крова и ВВЕСТИ ОТДЕЛЬНЫЕ опухолевыеклетки в любой участок тела животному-реципиенту в том числе и в хвостовую вену. Устройство содержит поршневые системы 1,2 и съемный взаимозаменяемый стеклянный капилляр 3. Одна из поршневых систем 1 представляет собой инсулиновый шприц емкостью 1 мл с насажеиной на него глазной инъекционной иглой 4. Стеклянный капилляр 3 с одной стороны посредством гибкого,например селиконового и жесткого,например стального переходников 5,6 соединен с инъекционной иглой 4 шпри АСтекпяннй капилляр благодаря своей прозрачности и малому поперечному диаметру (2 мм) позволяет визуально наблюдать с помощю стереоскопического микроскопа непоследовательное проникновение в него отдельных клеток. Клетки заходят в капилляр вместе с током жидкости под действием капиллярных сил или же за счет разрежения, создаваемого поршневой систе- ,мой 2. . Регулируя давление в поршне-У вой системе 2, можно выделить любое нужное количество клеток. Кроме того,визуальный контроль позволяет выбрать неповрежденные клетки, что значительно увеличивает вероятность образования опухолевых узлов и повышает эффективность метода.Устройствофункционирует следующм образом. 2 Перед инъекцией капилляр с выделенными клетками вставляют в пере-4 ходник 5. При увеличении давленя в поршневой системе 2 опухолевые клетки вместе с питательной средой попадают через переходники 5, 6 и инъекциониую иглу 4 в организм животного.Инсулиновый шприц в момент инъекции играет роль держателя капилляра и инъекционной иглы. После введения клетокс его помощью промывается игла и переходник отвозмохного попаданя в них сгустков крови и пузырьков воздуха, представляющих опасность для жизни животного.П р и м е р. Крысе вводят клетки леревиваемой рабдомиосаркомы РА-2 У животного с выросшими в легких метастазами предварительно перевитой аффинитетной опухолиРА-2 сразу же после его гибели (или забоя) извлекают легкие и вылущивают-20-30 опухолевых узлов. После кратковременной (12 мин механческой гомогенизации в солевом буфере приготовляют слабую суспензию опухолевых клеток и под КОНТРОЛЕМ МНКРОСКОПЗ С ПОМОЩЬЮ капал ляров изолируют отдельные опухолевые клетки. Капилляр с выделенными клеткаи (по 5 клеток накапилляр) до трансплантации их животнм находятся при пониженной температуре (на льду),что способствует сохранению жизнедеятельности этих клеток.Непосредственно перед инъекцией капиплярс клетками одним концом соединяют с инсулиновым шприцом, другим через гибкую тонкую трубку с поршневой системой. И уже этим устройством осуществляют инъекцию клеток. Для чего вводят инъекционную иглу в хвостовую вену животного ичс помощью20 мл шприца создают давление в сис теме. под действием повышенного давпения клетки вместе с солевым буфером попадают через инъекционную иглу в хвостовую вену и далее в кровяно русло животного. -Так как клетки перевнваемого штемма РА-2 обладают аффннитетом (сродст вом тропностью) к легочной ткани иклетки в благоприятных условиях среды,-размножаясь могут дать начало клонамопуколи(репидивированиенлнметестазы) то попавшие в кровяное руспо опухолевые клетки даже в-таком минимальном количестве,-проходячерез легочную ткань, задерживаются в нейи при своем размножении образуют отдельные опухолевые узлы клонального происхождения (т.е. от одной единственной клетки).Опыты показали, что при внутривенном введении клеток РА-2 в дозе 50,25,10 клеток У 80-902 животных в легкиквозникаютопухолевые узлы, числокоторык примерно соответствует чис лу введенных клеток, т.е. при инъкт цин 50 клеток в легкихкрыс обреэуется в среднем 43-48 узлов, при введении 25 клеток - 20-23 узла, до за ГО клеток дает 5-7 узлов на легкое, а при введении 5 клеток у 70-801животных в легких возникает по 2-3 узла.и даже доза 3 клетки при 60701 прививаемости дает по 1-2 удара на животное.дТаким образом, применение вффннн тетиого к легким леревнваемого штамма со способностью его клеток избирательно клоннроватъсн в легочной ткани совместно с устройством, позволяющим одновременно как изолировать под впзуалрным контролем отдельные опухолевые клетки, так н инъециролать эти же клетки животному-реципиенту дает возможность с высокой эффективностью получите отдельные опухолевые метастазы в легочной ткани лабораторнх жи ЕОТПЫХ. В СВС-Ю ОЧЕРЕДЬ, РОСТ МЕТЗСТЭ.ЗОВ В виде ограниченных, единичных ОПУХОЛЕБЫХ узлов обеспечивает ИХ операбельность1. Способ моделирования опухоли легкого путем внутривенного введения единичых опухолевых клеток экспериментальному животному, о т л н ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения избирательности и эффективности об- разования одиночных метастетическик 7 опухолей, ннъецируют опухолевые клеткнорганотроппо-метастазируюшего перевиваемого штамма в дозе 5 клеток и более.2. Устройство для моделирования опухоли легкого, содержащее стеклянный капилляр, одним концом соединенный через гибкую трубку с поршневой системой, о т л и ч-ающ е е С я тем, что, с целью повышения производитепьности н снижения повреждений единчных опухолевых клеток, в него введена вторая поршневая система в виде шприца с нвсаженной.на его открытый-конец инъекционной иглой, соединенный с полостью канала инъекционнойиглы гибкий переходник и жесткий переходник, с одной стороы соединенный с гибкнм переходиком, а.с другой с возможностью съема со стекляннымкапилляром. ц уОтветственная за выпуск Фаизова Э.З.