Штамм Kostanay-CM/08 M-2-12/D вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, предназначенный для производства диагностических и профилактических средств против репродуктивно-респираторного синдрома свиней европейского генотипа

(51) 61 39/42 (2006.01) 12 1/20 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ диагностических и профилактических средств против РРСС европейского генотипа. Принадлежность штамма-/08 к европейскому генотипу вируса РРСС определена в обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и представляет собой новый эпизоотический штамм вируса РРСС,репродуцированный в перевиваемой культуре клеток -145 с инфекционной активностью(5,250,14)ЭИД 50/см 3. Тесты на бактериальную и грибковую контаминацию показали стерильность штамма в отношении бактериальных и грибковых микроорганизмов. Полученный штамм -/08 вируса РРСС депонирован в Коллекции микроорганизмов Республиканского государственного предприятия Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан (РГП НИИПББ КН МОН РК) под регистрационным номером -2-12/ и хранится в лиофилизированном виде в ампулах под вакуумом при температуре не выше минус 40 С, защитная среда обезжиренное коровье молоко в соотношении 11 с вирусным материалом. Жизнеспособность штамма в стабильном состоянии поддерживается путем освежения на перевиваемой культуре клеток(72) Мамбеталиев Муратбай Табынов Кайрат Казыбаевич Сансызбай Абылай Рысбайулы Копоченя Алексей Анатольевич Орынбаев Мухит Бармакулы Зайцев Валентин Лукьянович Ажибаев Азамат Жасуланович Азанбекова Молдир Абдилдаевна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научноисследовательский институт проблем биологической безопасности Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) ШТАММ -/08 -2-12/ ВИРУСА РЕПРОДУКТИВНОРЕСПИРАТОРНОГО СИНДРОМА СВИНЕЙ,ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ ПРОТИВ РЕПРОДУКТИВНО-РЕСПИРАТОРНОГО СИНДРОМА СВИНЕЙ ЕВРОПЕЙСКОГО ГЕНОТИПА-/08 вируса репродуктивнореспираторного синдрома свиней (РРСС), семействародаевропейского генотипа,предназначенный для приготовления Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и представляет собой новый эпизоотический штамм вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней(РРСС),используемый для приготовления диагностических и профилактических средств против РРСС европейского генотипа. Известен штаммвируса РРСС,репродуцируемый на монослое первичной культуры клеток альвеолярных макрофагов свиней (АМС) при температуре 37 С в течение 240 ч после инокуляции. Цитопатическое действие вируса после инфицирования проявляется на 96 ч, при этом титр инфекционная активности вируса 3-го пассажного уровня в культуре клеток АМС достигает до 5,05 ТЦД 50/см 3. Штамм является слабовирулентным для подсвинков, так как у животных отмечено лишь незначительное повышение температуры тела (до 40,9 С) на 6-7 сутки после инфицирования. Других каких-либо клинических признаков у экспериментально зараженных поросят не отмечено. В результате проведенного молекулярно-генетического анализа штаммапо генам 2-7, отнесен к Европейскому генотипу.., 1991.., 1997. В связи с тем, что штамм хорошо репродуцируется в клетках АМС, является слабовирулентным и свободным от контаминации возбудителями других инфекций он рекомендован для изготовления вакцинных препаратов против РРСС. Приведенный выше аналог является наиболее близким предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков и признан в качестве прототипа. Задачей настоящего изобретения являлось получение штамма вируса РРСС, обладающего высокой репродуктивной активностью в системе культивирования, пригодного для производства и контроля диагностических и профилактических средств против РРСС европейского генотипа. Предлагаемое изобретение включает штамм,совокупность существенных признаков которого,обеспечивает получение следующих технических результатов. Штамм-/08 вируса РРСС,выделенный с помощью перевиваемой культуры клеток -145 (клоновый вариант клеток почки эмбриона макаки - резус МА-104) из пробы крови больной свиноматки 18-месячного возраста в п. Затобол Костанайского района Костанайской области Республики Казахстан в октябре 2008 г.,принадлежит к семейству , роду. Штамм -/08 на основе результатов полученных при постановке обратно транскриптазной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с использованием коммерческого набора-(, США) отнесен к европейскому генотипу вируса РРСС. Штамм-145 при температуре (37,00,5)С в течение 96-120 ч после инокуляции. Цитопатическое действие вируса после инфицирования проявляется на 72 ч, при этом титр инфекционной активности вируса 3-го пассажного уровня на 120 ч культивирования в культуре клеток -145 достигает до (5,250,14)ТЦД 50/см 3. При интраназальном инфицировании поросят вирусом,животные переболевали без явных клинических признаков болезни,за исключением незначительного посинения ушных раковин и повышения температуры тела до 40,6 С. В сыворотках крови поросят выявлены антитела к вирусу РРСС в титрах 140 (на 14 сутки) и 1320 (на 35 сутки) в ИФА. Вирус успешно адаптирован к перевиваемой клеточной линии -145 путем серийного пассирования(12 пассажей). Инфекционная активность штамма -/08 12 пассажного уровня составила (5,920,16)ЭИД 50/см 3. Выделенный штамм -/08 вируса РРСС депонирован в Коллекции микроорганизмов Республиканского государственного предприятия Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан (РГП НИИПББ КН МОН РК) под регистрационным номером -2-12/ и хранится в лиофилизированном виде в ампулах под вакуумом при температуре не выше минус 40 С, защитная среда обезжиренное коровье молоко в соотношении 11 с вирусным материалом. Жизнеспособность штамма в стабильном состоянии поддерживается путем освежения один раз в 3 года на перевиваемой культуре клеток -145. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм -/08 -2-12/ вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней,семействародаевропейского генотипа,депонированный в Коллекции микроорганизмов РГП НИИПББ КН МОН РК,предназначенный для приготовления диагностических и профилактических средств против репродуктивно-респираторного синдрома свиней европейского генотипа.