Праймер для детекции точечной мутации при генетическом дефекте DUMPS у крупного рогатого скота на основе полимеразной цепной реакции и полиморфизма длин рестрикционных фрагментов

(51) 61 10/00 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РЕАКЦИИ И ПОЛИМОРФИЗМА ДЛИН РЕСТРИКЦИОННЫХ ФРАГМЕНТОВ(57) Изобретение относится к области молекулярной биологии,в частности идентификации точечной мутацииу крупного рогатого скота и может быть использовано при молекулярно-генетических исследованиях методом полимеразной цепной реакции в сочетании с полиморфизмом длин рестрикционных длин. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в разработке эффективного праймера для определения гетерозиготных и гомозиготных носителей точечной мутации , позволяющий точно определить генотип животных. Праймер для определения носителей мутации на основе полимеразной цепной реакции в сочетаний с полиморфизмом длин рестрикционных фрагментов,включающий геном крупного рогатого скота в следующей последовательности 5 АААТ 353, в качестве фрагмента ДНК используется праймер со следующей нуклеотидной последовательностью 53, 5 ААТСАССТСС 3.(72) Усенбеков Есенгали СериковичБейшова Индира СалтановнаЖансеркенова Орик Оразимановна Касымбекова Шинар НиколаевнаТерлецкий Валерий Павлович(56)В.,.,С.//. 1994. 100, Рр. 511-514 Тюлькин С.В. Ахметов Т.М., Вафин Р.Р. Идентификация генетических мутацийиу быков-производителей // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. 2013. 216. С.329-33329359 4, 25.12.20146221591 1, 24.04.2001(54) ПРАЙМЕР ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ ТОЧЕЧНОЙ МУТАЦИИ ПРИ ГЕНЕТИЧЕСКОМ ДЕФЕКТЕУ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА НА ОСНОВЕ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ Изобретение относится к области молекулярной биологии, в частности идентификации точечной мутацииу крупного рогатого скота и может быть использовано при молекулярно-генетических исследованиях методом полимеразной цепной реакции в сочетании с полиморфизмом длин рестрикционных фрагментов. Известен праймер, включающий, геном крупного рогатого скота в следующей последовательности 5353 В,С (1994)..100 511-514. Недостатком указанного праймера является полученные в результате рестрикции фрагменты,размерами 53 п.н., 36 п.н. и 19 п.н., которые не четко видны при электрофорезе и не позволяет точно определить носителей точечной мутации . Задачей изобретения является разработка праймера более высокого разрешения для детекции носителей генетического дефектау племенных животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в разработке эффективного праймера для определения гетерозиготных и гомозиготных носителей точечной мутации , позволяющий точно определить генотип животных.- синдром недостаточности энзим системы уридин монофосфат - наследственное заболевание крупного рогатого скота рецессивного типа. Праймер для определения носителей мутации на основе полимеразной цепной реакции в сочетаний с полиморфизмом длин рестрикционных фрагментов,включающий геном крупного рогатого скота в следующей последовательности 5353, в качестве фрагмента ДНК используется праймер со следующей нуклеотидной последовательностью 53, 53. Изобретение осуществляется следующим образом. Базовой программой при проведении подбора служит компьютерная программа 3. Посредством которой осуществляют анализ выбранных участков ДНК для дизайна праймеров,который необходим для амплификации нужного фрагмента генадля модификации ПЦР. Основными критериями при выборе праймеров являются следующие параметры размер амплификата и длина фрагментов продукта полимеразной цепной реакции после рестрикции эндонуклеазой. С помощью компьютерной программы 3 подобрана последовательность праймера 5353,для детекции точечной мутации крупного рогатого скота . Использование данной пары праймеров позволяет амплифицировать фрагмент генадлиной 241 п.н. который после рестрикции эндонуклеазойдает фрагменты 158 п.н. и 83 п.н. у здоровых гомозиготных животных, 241 п.н., 158 п.н. и 83 п.н. у гетерозиготных носителей,у гомозиготных носителей мутации один фрагмент, размером 241 п.н. Следует отметить, что фрагменты 241 п.н.,158 п.н.,83 п.н. хорошо видны на электрофореграмме и способ позволяет определить генотип исследуемых животных с 100 точностью. В ходе подбора последовательностей прямого и обратного праймеров, мы исключили замену одного нуклеотида, предложенного авторомВ.(1994 г) в последовательности обратного праймера в позиции 19 по принципу комплементарности к последовательности гена . Участок генакрупного рогатого скота Условия проведения ПЦР с использованием праймеров денатурация при 95 С 45 сек, отжиг праймеров при 60 С 45 сек и элонгация 72 С 45 сек,количество циклов 35. Использование разработанного праймера позволит точно определить носителей мутации генетического дефектау крупного рогатого скота и провести выбракову скота. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Праймер для детекции точечной мутации при генетическом дефектеу крупного рогатого скота на основе полимеразной цепной реакции и полиморфизма длин рестрикционных фрагментов,включающий геном крупного рогатого скота,отличающийся тем, что в качестве фрагмента ДНК используют праймер со следующей нуклеотидной последовательностью 53, 53.