Способ приготовления вакцины против болезни Ауески

(51) 61 39/12 (2006.01) А 61 К 39/245 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Патент РФ 2138289, кл. А 61 К 39/12, А 61 К 39/245,1999 г Патент РФ 2065750, кл. А 61 К 39/245, 1996 г(54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БОЛЕЗНИ АУЕСКИ(57) Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и используется в приготовлении вакцины для профилактической иммунизации крупного рогатого скота, свиней и овец против болезни Ауески. Способ приготовления вакцины включает культивирование вируса в первично-трипсинизированной культуре клеток фибробласты эмбриона кур при температуре (371)С в течение 2 суток, сбор вирусной жидкости методом замораживанияоттаивания, объединение с раствором бикомпонентной защитной среды в соотношении 11 и высушивание методом лиофилизации. Приготовленный препарат по своим физикобиологическим характеристикам пригоден для вакцинации животных против болезни Ауески. Вакцина, высушенная методом лиофилизации сохраняет биологические свойства при температуре хранения (41)С в течение 2 лет.(72) Мамадалиев Сейдигапбар Мамадалиевич Мамбеталиев Муратбай Абдураимов Ергали Орынбасарович Абдрахманов Сарсенбай Кадырович(73) Дочернее государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности Республиканского государственного предприятия на праве хозяйственного ведения Национальный центр биотехнологии Республики Казахстан Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(56) Шитов А.Т., Гришок Л.П., Гребенникова О.С. Изучение поствакцинального иммунитета против опасных инфекционных болезней свиней в промышленных свинокомплексах//Вопр. вет.вирусол.,микробиол. и эпизоот.// Матер.науч. конф. ВНИИ вет. вирусол. и микробиол. Покров, 1992 г, с.107-108 Предварительный патент РК 14294, кл. А 61 К 39/12, 2004 г 16261 Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и используется для изготовления биопрепарата, пригодного для профилактики болезни Ауески крупного рогатого скота, овец и свиней. Известен способ приготовления вакцины из аттенуированного штамма ВГНКИ и инактивированных вакцин из вирулентных штаммов(Шитов А.Т., Гришок Л.П., Гребенникова О.С. Изучение поствакцинального иммунитета против опасных инфекционных болезней свиней в промышленных свинокомплексах // Вопр. вет. вирусол., микробиол. и эпизоот. Матер, науч. конф. ВНИИ вет. вирусол. и микробиол. -Покров,1992 г,с.107-108). Недостатком этого способа,является использование перевиваемых линий клеток для выращивания вируса, что создает угрозу возникновения злокачественных опухолей, более продолжительный срок культивирования,применение сложных составов защитных сред и вследствие чего увеличение времени высушивания,а также низкие иммуногенные свойства(защищенными от болезни оказались лишь 50-70 вакцинированных животных). Целью изобретения является способ получения вакцины против болезни Ауески, исключающий вышеперечисленные недостатки. Поставленная цель достигается следующим образом. Из 10-11 сут развивающихся куриных эмбрионов готовят первично-трипсинизированную культуру клеток по общепринятой методике,которые выращивают в 3-литровых круговых сосудах на аппаратах барабанного или стелажного типов или 1,5-литровых матрасах в стационарных условиях, при посевной концентрации клеток 90050 тыс.кл/см 3 и 50010 тыс.кл/см 3 соответственно. При сформировании полного монослоя из сосудов удаляют ростовую среду, клетки инфицируют разведенным поддерживающей средой в соотношении 1100 вирусом (штамм УБ-95 предварительный патент РК 10101) внося в сосуды 30030 см 3, в матрасы 15020 см 3 . Зараженные клетки инкубируют при температуре (371)С в течение не более 2 сут. Сосуды, в которых наблюдаются цитопатические изменения на 80-90 клеточного монослоя (обычно через 24-48 час), отбирают, и замораживают при температуре минус 40 С, в течение 16-18 час,предварительно взяв с каждого сосуда пробу для определения стерильности. Размораживание сосудов проводят при температуре 18-20 С, содержимое объединяют в одну емкость и берут пробу для определения биологической активности. В емкость с вируссодержащей суспензией добавляют защитную среду (содержащую 6 пептона и 5 лактозы) в соотношении 11,пенициллин 600000 ЕД нистатин 15000 ЕД стрептомицин 0,6 г на 1 дм 3 смеси. Тщательно перемешивают и разливают в ампулы при помощи специального дозирующего устройства. Лиофилизируют на сублимационной установке при следующем режиме температура замораживания материала минус 55 С в течение 4-6 час,вакуумирование камеры в течение 2-3 час. Степень разряжения конденсированных газов в вакуумной системе от 4 Па до 7 Па. После включают обогрев полок постепенно до 40 С, в процессе высушивания до температуры в материале 16-18 С, досушивание при температуре 18-25 С в течение 4-6 час при температуре обогрева полок не выше 35 С. После окончания процесса сушки выключают вакуумцый насос, в камеру аппарата постепенно впускают воздух через специальный фильтр. Ампулы запаивают на карусельно-коллекторном аппарате с помощью специальных горелок,работающих на кислородно-пропановой смеси. Проверка вакуума в ампулах осуществляется с помощью аппарата Д 1 Арсенваль. Приготовленная по данной технологии вакцина имеет биологическую активность, обеспечивающая содержание в прививной дозе не менее 5103,0 ТЦД 50,содержание остаточной влаги не более 4 и обладает следующими иммунобиологическими свойствами Безвредность. Вакцина,при подкожном введении овцам в возрасте от 6 мес до 1,5 года в разведении 110 (100 кратное превышение) не вызывает каких-либо отклонений в физиологическом состоянии животных в течение 21 суток наблюдения. Иммуногенность. У овец старше 6 мес возраста при подкожной иммунизации в разведении 1200 вакциной,невосприимчивость к заражению вирулентным вирусом наступает через 5-7 суток и сохраняется не менее 12 месяцев при однократной и не менее 16 месяцев при двукратной иммунизации,при 90-100 защите вакцинированных животных. Устойчивость. При температурах 371 С и 201 С вакцина сохраняется без существенного снижения активности в течение 5 и 15 суток соответственно, при 41 С вакцина сохраняется на протяжении 2 лет. Произведенная по предлагаемой нами технологии вакцина против болезни Ауески успешно применяется в практических условиях для профилактики заболевания. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ приготовления вакцины против болезни Ауески, включающий культивирование вируса на перевиваемых линиях клеток, использование защитных сред, отличающийся тем, что вирус культивируют на первично-трипсинизированной культуре клеток фибробластов эмбрионов кур,клетки инкубируют не более 2 суток, замораживают при температуре минус 40 С с последующей лиофилизацией в течение 48 часов, используя в качестве защитной среды бикомпонентную защитную среду.