Средство гепатопротекторное, обладающее антиоксидантной активностью и способ его получения

(51) 61 36/00 (2006.01) 61 36/28 (2006.01) 61 36/52 (2006.01) 61 36/53 (2006.01) 61 36/84 (2006.01) 61 1/16 (2006.01) 61 39/06 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ за счет использования новых источников местного натурального растительного сырья достигается путем создания комплексного гепатопротекторного средства, содержащего в качестве активного начала экстрактивные вещества травы душицы обыкновенной, мать и мачехи, тимьяна ползучего,листьев валерианы, цветов липы сердцевидной,перегородок грецкого ореха в соотношении 152152. Усиление специфической активности и гепатопротекторного действия, повышение выхода биологически активных веществ достигается тем,что способ получения предлагаемого средства осуществляется путем экстракции измельченного сырья растительного происхождения этанолом и последующим упариванием до получения сухого вещества, при этом в качестве сырья используют сухой сбор растительного сырья, включающий траву душицы обыкновенной, мать и мачехи,тимьяна ползучего, листьев валерианы, цветов липы сердцевидной,перегородок грецкого ореха,проводят последовательную двукратную экстракцию 50 -ным этанолом при соотношении 18 сырье- экстрагент и температуре 20-25 С в течение 20-24 часов, полученные экстрагенты отфильтровывают и смешивают.(72) Аралбаева Арайлым Нугмановна Мурзахметова Майра Кабдраушевна Маматаева Айгуль Тумаевна Турмухамбетова Вера Константиновна Кайынбаева Айида Канатбековна Утегалиева Раиса Сактагановна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Институт физиологии человека и животных Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(57) Изобретение относится к медицине, конкретно к клинической фармакологии, и может быть использовано для фармакологической коррекции метаболизма, функции и структуры паренхимы печени, и касается гепатопротекторных средств,обладающих антиоксидантной активностью, и способов их получения из растительного сырья. Расширение ассортимента гепатопротекторных средств, обладающих антиоксидантной активностью Изобретение относится к медицине, конкретно к клинической фармакологии, и может быть использовано для фармакологической коррекции метаболизма, функции и структуры паренхимы печени, и касается гепатопротекторных средств,обладающих антиоксидантной активностью, и способов их получения из растительного сырья. В настоящее время для поддержания функции печени широко используются средства, различные по структуре и механизму действия, но обладающие избирательным действием в отношении печени гепатопротекторы. Их действие направлено на нормализацию обменных процессов и гомеостаза в печени, повышение устойчивости гепатоцитов к патогенным воздействиям,стимуляцию регенеративных процессов,восстановление паренхимы печени и нормализацию ее физиологических функций. Известны различные гепатопротекторы и способы их получения, содержащее в качестве активного начала экстракты растительного происхождения. Известен экстракт биомассы.полученный методом культуры каллусов. Он содержит полифенольный - комплекс,состоящий из даидзеина, ретузина, генистеина,формононетина, маакиаина, медикарпина, что способствует эффективному лечению хронических гепатитов (Патент РФ 2244553, МКП 7 кл. А 61 35/78, А 61 31/05, А 61 Р 1/16, опубл. 20.01.2005 г.). Следующий спиртовой экстракт гребней древянистой лианы лимонника китайскогос содержанием до 40 полифенольных соединений, известен тем, что повышает интегральную антирадикальную активность печени. Способ его получения включает сушку сырья при температуре, не превышающей 50 С, его измельчение и экстрагирование 40-ным этанолом при соотношении сырья и экстрагента 1 1(Патент РФ 2179031, МКП 7 кл. А 61 35/78, опубл. 10.02.2002 г.) Также известен спиртовой экстракт гребней калины, повышающий сопротивляемость организма к воздействию химических веществ техногенного происхождения и к стрессовым ситуациям,полученный путем экстракции спиртом предварительно высушенных и измельченных гребней калины (Патент РФ 2177330, МКП 7 кл. А 61 35/78 опубл. 27.12.2001 г.) Ещ один известный экстракт из корневищ и корней лабазника шестилопастного, получен при нагревании сырья водой в соотношении сырьеэкстрагент 110-15 в течение 30 минут, фильтрации,упаривании до 1/3-1/5 объема и очистки охлаждением упаренного концентрата, осаждением из него целевого продукта добавлением трехкратного объема 96 этанола, отстаивания,фильтрования осадка его промывания последовательно 96 этанолом и эфиром (патент РФ 2259208, МКП 7 кл. А 61 35/78 опубл. 27.08.2005 г.) Известно также гепатопротекторное средство и способ его получения, в качестве исходного сырья 2 которого используют амброзию полынолистную,собранную в фазу развития до цветения (Патент РФ 2270686, МКП 7 кл. А 61 35/78 опубл. 27.02.2006 г.). При этом сырье измельчают и экстрагируют трижды этанолом, извлечения объединяют, фильтруют и упаривают в вакууме. Водно-спиртовый кубовый остаток смешивают с горячей водой и нагревают до полного удаления этанола,затем очищают от липофильных соединений. Полученное очищенное водное извлечение суммы полифенольных соединений делят на две равные порции. Одну порцию выпаривают досуха и получают сухую сумму полифенольных соединений - фракцию 1. Вторую порцию последовательно обрабатывают растворителями - сначала эфиром с выделением фракции 2, затем обрабатывают этилацетатом с выделением фракции 3, затем обрабатывают бутанолом с выделением фракции 4. На каждую экстракцию берут растворители в зависимости от объема водного извлечения. Время каждой экстракции составляет 5 минут, затем растворители удаляют в вакууме до сухого остатка. Все известные гепатопротекторы имеют спектр фармакотерапевтической активности, ограниченный только гепатозащитным действием. Одна из основных составляющих комплексного воздействия на печень - антиоксидантная активность в них отсутствует. Кроме того, способы получения известных гепатопротекторов не способствуют выходу биологически активных веществ,усиливающих специфическую активность. Известны гепатопротекторные средства растительного происхождения,обладающие антиоксидантной активностью. Активным агентом этих средств является группа флавоноидных соединений , выделенных из экстрактов плодов расторопши. на основе которых был разработан ряд лекарственных препаратов зарубежного производства - карсил(Германия) (Лекарственные препараты зарубежных фирм в России, М.- Астрафармсервис, 1993). Однако все эти препараты зарубежного производства в связи с чем очевидна актуальность в их импортозамещении. Для этого необходимо провести поиск новых источников сырья среди природных,в частности растительных,дикорастущих видов непищевого назначения местного значения и наладить выпуск гепатопротекторных средств отечественного производства. В известном гепатопротекторном средстве растительного происхождения,обладающего антиоксидантными свойствами(Патент РФ 2310467, МКП 7 А 61 36/73, А 61 Р 1/16, А 61 Р 39/06 опубл. 2008 г.), в качестве активного агента используется экстракт надземной части лабазника вязолистного ((.) ). Способ получения данного средства заключается в экстракции растительного сырья 70-ным этанолом методом реперколяции в течение 14 часов Наиболее близкими решениями к заявляемым,является гепатопроекторное средство, обладающее антиоксидантным действием, и способ его получения (заявка РФ 2009100195, МКП 7 А 61 36/00, опубл. 20.07.2010 г.). Согласно известному решению в качестве активного начала оно содержит экстракт из надземной части василька шероховатого(.). Способ получения данного средства осуществляется путем экстракции измельченного сырья растительного происхождения и отделения полученного экстракта, при этом экстракции подвергают надземную часть василька шероховатого измельченную до размеров частиц 2-4 мм, 70 этанолом при температуре 75-80 С в течение 1-1,5 ч, при соотношении сырье - экстрагент 115-120 и кратности экстракции 3 с последующим упариванием досуха полученного экстракта. Однако известные гепатопроекторные средства,обладающее антиоксидантным свойством,в качестве активного агента используют только один источник растительного происхождения, что существенно ограничивает их специфическую активность и сужает рамки гепатозащитного действия. Задачей изобретения является создание нового отечественного комплексного гепатопротекторного средства растительного происхождения,обладающего выраженным антиоксидантным действием, и способа его получения. Технический результат расширение ассортимента гепатопротекторных средств,обладающих антиоксидантной активностью,усиление специфической активности и повышение выхода биологически активных веществ. Технический результат расширение ассортимента гепатопротекторных средств,обладающих антиоксидантной активностью за счет использования новых источников местного натурального растительного сырья достигается путем создания комплексного гепатопротекторного средства, содержащего в качестве активного начала экстрактивные вещества травы душицы обыкновенной, мать и мачехи, тимьяна ползучего,листьев валерианы, цветов липы сердцевидной,перегородок грецкого ореха в соотношении 152152. Технический результат усиление специфической активности и гепатопротекторного действия,повышение выхода биологически активных веществ достигается тем, что способ получения предлагаемого средства осуществляется путем экстракции измельченного сырья растительного происхождения этанолом и последующим упариванием до получения сухого вещества, при этом в качестве сырья используют сухой сбор растительного сырья, включающий траву душицы обыкновенной, мать и мачехи, тимьяна ползучего, листьев валерианы, цветов липы сердцевидной,перегородок грецкого ореха,проводят последовательную двукратную экстракцию 50-ным этанолом при соотношении 18 сырье - экстрагент и температуре 20-25 С в течение 20-24 часов, полученные экстрагенты отфильтровывают и смешивают. Заявляемое средство, полученное данным способом,обладает широким диапазоном терапевтического действия и повышенной специфической активностью. Оно представляет собой сухую субстанцию темно-коричневого цвета,с характерным специфичным запахом, хорошо растворим в 50 этаноле. При его создании все растения, входящие в его состав были выбраны в результате экспериментов в условиях, как проявляющие хорошие антиоксидантные и мембранопротекторные свойства, а в условиях- как эффективный гепатопротектор,предотвращающий повреждение паренхимы печени гепатотоксикантом. Трава душицы обыкновенной ()многолетнее травянистое растение. В е химический состав входит эфирное масло, в котором содержится тимол, придающий растению характерный запах и вкус, карвакрол, значительное количество дубильных веществ. В листьях и цветках растения находится также аскорбиновая кислота и жирное масло. В связи с наличием активирующего влияния на перистальтику и секрецию органов желудочнокишечного тракта растение находит применение при дискинезиях желчевыводящих путей, холециститах,гастритах с пониженной кислотностью, колитах и энтероколитах, метеоризме. Препараты душицы обладают противовоспалительными, мочегонными и желчегонными свойствами и способностью губительно действовать на микробную флору(Минаева В.Г. Лекарственные растения Сибири опубл 1991 г.). Мать и мачеха - многолетнее травянистое растение. В химический состав листьев данной травы входят углеводы и родственные соединения, такие как полисахариды, пектин,инулин эфирное масло, ситостерин, стигмастерин,дубильные вещества (8,46), галловая, яблочная и винная кислоты, алкалоид туссилагин декстраны,слизи, дубильные вещества, флавоноиды - рутин,гиперозид, кемпферол, кверцетин. И прикорневые листья и соцветия содержат горькие гликозиды,органические кислоты, дубильные вещества,инулин,сапонины,аскорбиновую кислоту,провитамин А и другие соединения. Благодаря содержанию в листьях растения большого количества слизи оно оказывает обволакивающее действие на слизистые полости рта, глотки и гортани. Дубильные вещества, каротиноиды,флавоноиды и стерины оказывают комплексное противовоспалительное действие - уменьшают проницаемость стенки капилляров, барьерная роль которых существенно нарушается при воспалении,что способствует снижению интоксикации,присущей любому воспалительному процессу. В сочетании с другими лекарственными растениями они часто применяются в комплексной терапии(Минаева В.Г. Лекарственные растения Сибири опубл 1991 г.). 3(Минаева В. Г. Лекарственные растения Сибири опубл 1991 г.). Грецкий орех или волошский орех (.). Все части растения содержат биологически активные вещества кора - тритерпеноиды,стероиды, алкалоиды, витамин С, дубильные вещества, хиноны. Его перегородки обладают уникальными лечебными свойствами, из них делают отвары или настройки. Они восполняют дефицит йода в крови. Настой перегородок грецкого ореха помогает при пяточных шпорах, поносе, для лечения зоба, доброкачественных опухолей (мастопатии и фибромиомы матки), предраковых заболеваний и в качестве эффективного успокаивающего средства при нервных расстройствах (Наталья ФЕДИНА АиФ Здоровье 28 (568) от 14 июля 2005 г. Биологически активные вещества растительного происхождения В трех томах. М. Наука, 2001). Количественные соотношения компонентов в заявляемом средстве были рассчитаны на основе фармакологических требований и подобраны экспериментально. В ходе экспериментов была определена минимальная концентрация, при которой проявляется значительный антиоксидантный эффект фитоэкстракта (таблица 1 и 2 в тексте описания) для каждого растения. На основе полученных данных,относительно оптимальных значений концентраций экстрактов растений были рассчитаны количественные соотношения составляющих заявляемого средства. Апробация составов при соотношении компонентов,выходящих за граничные значения заявляемых величин, иными словами, величин превышающих,либо ниже пределов оптимальных концентраций,показала, что в этом случае резко снижаются его и гепатопротекторное воздействие и антиоксидантная активность. В заявляемом способе получения фитокомпозиции для усиления специфической активности и повышения выхода биологически активных веществ были определены наиболее оптимальные показатели концентрации и времени экстрагирования. С этой целыо были проведены исследования антиоксидантной активности различных концентраций компонентов растительного препарата при 20 и 24 часовой экстракции этанолом(таблица 1, 2). Антиоксидантную активность экстрактов оценивали по степени накопления малонового диальдегида в микросомальных фракциях печени. Концентрацию считали из рассчета 1 мг сухого веса растения на 1 мг белка(микросом печени). Таблица 1 Влияние 20 часовых экстрактов растений на степень накопления продуктов ПОЛ . Тимьян ползучий или чабрец обыкновенный или богородская трава верест (1) многолетнее травянистое растение. Химический состав надземной части растения содержит эфирное масло, флавоноиды, тритерпеновую, тимуновую(0,05), урсоловую, олеоноловую, кофейную,хлорогеновую, хинную кислоты, горечи, смолы,дубильные вещества, сапонины. Тимьян ползучий обладает бактерицидным, прогивосудорожным,успокоительным,болеутоляющим,ранозаживляющим и антигельминтным действием. Надземная часть растения входит в состав отхаркивающих сборов, вяжущего и желчегонного сборов и сбора для ванн при воспалении суставов. В народной медицине чабрец применяют при невралогии, различных неврозах, как потогонное,мочегонное, противосудорожное, успокаивающее и противогипертоническое средство (Минаева В.Г. Лекарственные растения Сибири опубл 1991 г.). Валериана лекарственная - растение семейства валериановых многолетнее травянистое растение. Химический состав листьев валерианы обусловлен комплексом содержащихся в ней веществ, прежде всего эфирным маслом и алкалоидами. Главные компоненты масла борнилизовалерьянат, изовалерьяновая кислота, борнеол,камфен, -пинен, лимонен и другое. Валериана действует успокаивающе на нервную систему,обладает противосудорожным и противоспазматическим действием. В народе ее также считают противоглистным, поддерживающим силы и способствующим пищеварению средством. Водный и спиртовый настой принимают как успокаивающее и обезболивающее средство при нервном возбуждении, эпилепсии, бессоннице,сердечной астме, истерии, разного рода неврозах сердца и сердечно-сосудистой системы,заболеваниях желудка и кишечника, кожных болезнях, экземах и многом другом. (Минаева В. Г. Лекарственные растения Сибири опубл 1991 г.). Цветы липы сердцевидной ( ). В цветках липы сердцевидной содержится значительное количество флавоноидных соединений, в числе которых флавоны, флавонолы и флавононы. В медицине используют настой цветков липы (липовый цвет) как потогонное средство при простудных заболеваниях и как бактерицидное для полоскания полости рта. Настой липы и получаемые из нее препараты обладают противовоспалительным,жаропонижающим действием и способствуют стимулированию процессов репарации, повышению мышечной силы Наименование экстракта Душица обыкновенная Мать и мачеха Тимьян ползучий 4 Наименование экстракта Валериана обыкновенная Липа сердцевидная Орех грецкий Таблица 2 Влияние 24 часовых экстрактов растений на степень накопления продуктов ПОЛНаименование экстракта Душица обыкновенная Мать и мачеха Тимьян ползучий Валериана обыкновенная Липа сердцевидная Орех грецкий Анализируя полученные данные исследований 20- и 24-часовых экстрактов отобранных растений,следует отметить, что все они обладают антиоксидантным действием на мембраны гепатоцитов, хотя дозозависимо влияют на процессы перекисного окисления липидов (далее ПОЛ). Полученные данные также показали, что исследованные растительные экстракты проявляют различный противоокислительный эффект в зависимости от времени экстракции, а именно, 20 часовые экстракты оказали лучшее действие по сравнению с 24-часовыми экстрактами. Несмотря на то,что некоторые растения оказывали прооксидантное действие при 20- и 24- часовой экстракции, прооксидантная активность 20-часовых экстрактов менее выражена по сравнению с 24 часовой. Исследования также показали, что в подавляющем большинстве случаев при минимальных концентрациях 20-часовые экстракты не оказывают прооксидантных свойств в отличие от 24-часовых. Таким образом, результаты исследований позволяют сделать заключение о том, что 20-часовая экстракция более приемлема и удобна при создании фитокомпозиций в отношении затрат времени,сырья и эффективности. На основании полученных данных была получена возможность определить оптимальную концентрацию каждого компонента для дальнейшего расчета их соотношения в фитокомпозиции. Количественные соотношения заявляемого средства выглядят следующим образом трава душицы обыкновенной - 1 часть, трава мать и мачехи - 5 частей, трава тимьяна ползучего - 2 части, листьев валерианы обыкновенной - 1 часть,цветов липы - 5 частей, перегородок грецкого ореха- 2 части (таблица 3). Таблица 3 Количественное содержание составляющих заявляемого средства в 1 г Наименование растения Душица обыкновенная-Мать и мачеха-Тимьян ползучий-Валериана обыкновенная-Липа сердцевидная-ТаГрецкий -В основу изобретения положены результаты исследований антиоксидантных свойств заявляемого гепатопротекторного средства комплексного фитопрепарата (далее ФП). Были проведены эксперименты в условиях как, так. Эффект действия заявляемого ФП сравнивали с гепатопротекторным действием витамина Е - -токоферола (далее -ТФ) у Части растения Трава Трава Трава Листья Цветы Перегородки интактных крыс и крыс травленных четыреххлористым углеродом. Так, в условияхбыли проведены исследования влияния различных концентраций ФП на процессы перекисного окисления липидов в мембранах печени,а также его мембраностабилизирующее свойство на модели эритроцитарных мембран. Для сравнения 5(таблица 4,5). Анализ приведенных данных показал, что антиоксидантное и мембраностабилизирующее действие заявляемого ФП превышает таковые показатели -ТФ в условиях. Следует также отметить,что компоненты,проявляющие прооксидантный эффект, не оказали действия повышающего интенсивность накопления перекисных продуктов в составе заявляемого средства. Таблица 4 Уровень продуктов ПОЛ при действии различных концентраций заявляемого ФП и -ТФКонцентрация веществ мг с.в./мг б. 0 0,0005 0,0025 0,005 0,025 0,05 0,125 0,25 0,5 1,25 Таблица 5 Уровень гемолиза эритроцитов в 0,4 растворена фоне действия различных концентраций заявляемого ФП и -ТФКонцентрация веществ мг с.в./мл СЭ 0 0,0005 0,001 0,0025 0,005 0,01 0,025 0,05 0,075 В следующей серии в условияхобъектами исследований являлись кровь(эритроциты,сыворотка) и микросомальные фракции печени. При этом определялась осмотическая, перекисная резистентность эритроцитов,проницаемость эритроцитарных мембран. В гепатоцитах исследовалась интенсивность процессов ПОЛ и активность фермента супероксиддисмутазы (СОД). В сыворотке крови и микросомах печени определялось количество общего и свободного билирубина,активность аминотрансфераз(АсАт,АлАт), проводилось определение тимоловой пробы. Эксперименты в условияхбыли проведены на 130 крысах-самцах весом 300- 350 г. Всех животных разделили на 8 группгруппа контроль, группе вводили подкожно тетрахлорметанСС 4 (далее ТХМ), растворенный в оливковом масле (/, 11), из рассчета 2,0 мл/кг веса животного. Животные ,игрупп получали перорально ФП в течение 2-х недель из расчета 100, 200, 400 мг/кг массы тела, на 14-день им вводили подкожно раствор СС 4.группа получала перорально витамин Е из рассчета 100 мг/кг массы тела в течение 14 дней и однократно раствор ТХМ в последний день опыта. Животным 6 игрупп давали перорально ФП и витамин Е из рассчета 200 мг/кг и 100 мг/кг массы тела соответственно. На 14-день крысам данных опытных групп вводили подкожно оливковое масло. Было изучено влияние ТХМ на фоне действия ФП на процессы ПОЛ в микросомах печени (фиг.1) Изучение действия ТХМ показало, что одноразовое введение гепатотоксиканта вызывает достоверное повышение продуктов перекисного окисления в мембранах гепатоцитов более чем в 4 раза по сравнению с контролем. Тогда как при действии ТХМ на фоне введении различных концентраций ФП в течении 14 дней наблюдается снижение уровня образования ТБК-активных продуктов. Таким образом при индукции процессов перекисного окисления отмечается прирост малонового диальдегида (далее МДА), во всех исследуемых группах. Тем не менее, при введении ФП снизился уровень ТБК-активных продуктов. При изучении активности фермента супероксиддисмутазы (далее СОД), являющегося одним из важных звеньев эндогенной антиоксидантной защиты клеток, была выявлена корреляция между изменением активности фермента и интенсивностью процессов ПОЛ. Так введение гепатотоксиканта снижает активность фермента, тогда как применение ФП предотвращает инактивацию СОД. Изменение состояния мембран эритроцитов при действии токсиканта на фоне применения ФП оценивали по степени перекисного гемолиза клеток. При введении ФП животным отмечалось повышение устойчивости эритроцитов к действию перекиси водорода. Оценка активности аминотрансфераз,определение концентраций свободного и общего билирубина, постановка тимоловой пробы на микросомальной фракции гепатоцитов и сыворотке крови показали результаты, коррелирующие с вышеприведенными данными,тем самым дополнительно подтверждая ухудшение состояния печени при действии гепатотоксического агента и повышение резистентности органа при применении ФП. По проявлению антиоксидантных и мембраностабилизирующих свойств различных концентраций ФП можно расположить их следующим образом 100 мг/кг 400 мг/кг 200 мг/кг. Наилучший эффект наблюдается при применении ФП в концентрации 200 мг/кг массы тела животного. Следующая серия опытов была направлена на сравнение антиоксидантных свойств ФП с широкоизвестным антиоксидантом -ТФ. Было опрределено влияние ТХМ на фоне действия ФП и-ТФ на процессы ПОЛ в микросомах печени(фиг.2) Анализ диаграммы, приведенной на фиг.2 показал, что при определении перекисных продуктов в микросомах печени контрольных и опытных крыс при индукции ПОЛ в течение 60 мин,прирост накопления МДА в контрольном препарате микросом увеличивается в каждом исследуемом интервале времени. Применение ФП и -ТФ позволяет предотвратить неблагоприятное воздействие ТХМ. Так содержание ТБК-активных продуктов в присутствии гепатопротекторов незначительно превышают контрольные значения,тогда как прирост накопления МДА в микросомах печени крыс, подвергнутых действию токсиканта,было в 1,5-2 раза выше контрольных величин(р 0,005). Анализ результатов сравнительных исследований позволяет предположить,что защитный эффект заявляемого ФП соответствует эффекту -ТФ. При интоксикации ТХМ активность СОД снизилась до 5, тогда как при действии -ТФ и ФП данные показатели были равны 32 и 34 соответственно. Мембраностабилизирующий эффект ФП и -ТФ подтверждается тем, что степень гемолиза эритроцитов крыс, получавших протекторные препараты, соответствует контролю, тогда как у животных с моделью гепатита отмечается повышение проницаемости эритроцитарных мембран и соответственно повышается гемолиз эритроцитов. Было определено влияние ТХМ на активность аминотрансфераз АсАт на фоне действия ФП иТФ (фиг.3). Анализ приведенной диаграммы показал, что при определении активности аминотрансфераз в микросомах печени и сыворотке крови ФП и -ТФ оказывают практически одинаковый положительный эффект на состояние клеток печени. Об этом свидетельствует уровень содержания АсАт в крови, несмотря на то, что уровень данного фермента в микросомах печени значительно не изменился по сравнению с контролем. Результаты исследований активности аланин-аминотрансферазы, показали, что действие-токоферола и ФП позволяют снизить содержание фермента как в тканях, так и в сыворотке. Следует также отметить, что влияние ФП на уровень АлАт оказался более выраженным по сравнению с -ТФ у интактных крыс. Согласно результатам предыдущей серии опытов, при развитии токсического гепатита отмечается увеличение активности аминотрансфераз как в клетках печени, так и в крови. Использование ФП и -ТФ привело к значительному снижению концентраций аспартат-аминотрансферазы в печени и крови. Кроме того, несмотря на то, что уровень АсАт при действии ФП й -ТФ был выше относительно контроля, названные антиоксиданты предотвратили избыточное выведение ферментов в кровяное русло. Также было определено влияние ТХМ на активность АлАт на фоне действия ФП и -ТФ(фиг.4). Согласно приведенной диаграммы влияния ТХМ на активность АлАт на фоне действия ФП и ТФ, следует, что в отличие от данных полученных в результате изучения АсАт, содержание АлАт в микросомах печени и сыворотке животных,получавших ФП и -ТФ оставалось ниже контрольных значений, несмотря на повреждающее действие ТХМ. Анализ данных биохимических показателей выявил, что ФП так же, как и -ТФ позволяет предупредить такие патологические отклонения, как функциональная недостаточность и воспалительный процесс паренхимы органа, о чем дополнительно свидетельствуют показатели тимоловой пробы,содержание общего и свободного билирубина. Результаты опытов исследования влияния заявляемого ФП на состояние клетокпоказали, что его применение позволяет улучшить функциональное состояние гепатоцитов и повысить резистентность эритроцитарных мембран к действию гепатотоксиканта. Эксперименты в условияхвыявили, что протекторный эффект ФП зависит от его дозы. В результате наших исследований были получены схожие данные, указывающие на то, что увеличение концентраций фитопрепарата может привести к снижению его антиоксидантного эффекта в экспериментах с животными. Таким образом,наиболее оптимальная концентрация фитопрепарата равна 200 мг/кг массы тела. Изучение антиоксидантных и мембранопротекторных свойств-токоферола проводилось с целью полной оценки мембраностабилизирующей и антиокислительной 7 активности заявляемого ФП. Результаты исследованияпоказали, что вляние фитокомпозиции на состояние мембран схоже с действием витамина Е. Таким образом, действие препарата направлено на снижение процессов перекисного окисления липидов мембран клеток печени, сопровождающих развитие большинства патологических процессов. Новый растительный препарат позволяет предотвратить избыточное образование свободных липоперекисных радикалов и тем самым сохранить целостность,следовательно нормальное функционирование клеток при действии различных повреждающих факторов. Данный фитопрепарат может применяться для профилактики, как дополнительное средство при лечении, а также ввиду широкого спектра действия его составляющих компонентов, может использоваться для улучшения состояния клеток печени и всего организма в целом,после перенесенной болезни. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Гепатопротекторное средство, обладающее антиоксидантной активностью, содержащее в качестве активного начала экстракт растительного происхождения, отличающееся тем, что в качестве активного начала содержит экстрактивные вещества травы душицы обыкновенной, мать-и-мачехи,тимьяна ползучего, листьев валерианы, цветков липы сердцевидной, перегородок грецкого ореха в соотношении 152152. 2. Способ получения гепатопротекторного средства,обладающего антиоксидантной активностью, путем экстракции измельченного сырья растительного происхождения этанолом и последующим упариванием до получения сухого вещества, отличающийся тем, что в качестве сырья используют сухой сбор растительного сырья,включающий траву душицы обыкновенной, мать-имачехи, тимьяна ползучего, листьев валерианы,цветков липы сердцевидной, перегородок грецкого ореха, проводят последовательную двукратную экстракцию 50 -ным этанолом при соотношении 18 сырье-экстрагент и температуре 20-25 С в течение 20-24 часов, полученные экстрагенты отфильтровывают и смешивают.