Способ гормональной стимуляции суперовуляции овцематок-доноров каракульской породы

КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ день полового цикла вводят сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 11 в дозе 12 МЕ/кг,овцематкам донорам с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 21 вводят сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 31 на 10-й день эстрального цикла - в дозе 12 МЕ/кг, на 11-й день сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 21 в дозе 7 МЕ/кг, на 12-й день сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 11 в дозе 7 МЕ/кг, на 13-й день сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 1 1 в дозе 12 МЕ/кг, овцематкам донорам с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 11 вводят сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 31 на 10-й день эстрального цикла в дозе 12 МЕ/кг,на 11-й и 12 дней фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 11 по 7 -/кг и на 13-й день сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 11 в дозе 12 /кг. Внедрение предлагаемого способа в технологию трансплантации обеспечит вызывание стабильной суперовуляции и позволяет получить максимальное количество полноценных жизнеспособных эмбрионов, которые гарантируют сохранение и ускоренное размножение особо редких и исчезающих оригинальных окрасок расцветок цветных каракульских овец с наименьшими затратами.(72) Алибаев Нурадин Бекетауов Оринбек Адилбеков Нургали Чимкентбаевич Калгимбаева Мариям Адилбековна Бедебаев Галымжан Муратович(73) Республиканское государственное предприятие Юго-Западный научно-производственный центр сельского хозяйства(56) Сергеев Н.П., Мазепкин С.А., Ефремова М.И. Методические рекомендации по трансплантации эмбрионов у овец. Всесоюзный научноисследовательский институт животноводства. Дубровицы, 1988, с. 4-8(54) СПОСОБ ГОРМОНАЛЬНОЙ СТИМУЛЯЦИИ СУПЕРОВУЛЯЦИИ ОВЦЕМАТОКДОНОРОВ КАРАКУЛЬСКОЙ ПОРОДЫ(57) Изобретение относится к овцеводству, в частности к каракулеводству. В способе гормональной стимуляции суперовуляции овцематок-доноров каракульской породы,определяют соотношение фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов в сыворотке жеребых кобыл и крови овцематок-доноров после прихода в охоту, после чего осуществляют введение сыворотки жеребых кобыл овцематкам-донорам, при этом овцематкамдонорам с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 11 вводят сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 31 на 10-й день астрального цикла - в дозе 12 МЕ/кг, на 11 день - в дозе 7 МЕ/кг, на 12-й день - сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 21 в дозе 7 МЕ/кг и через 24 часа после последнего введения на 13-й 14759 Изобретение относится к овцеводству, в частности к каракулеводству, и может быть использовано при сохранении генофонда редких и исчезающих оригинальных окрасок, расцветок каракульских овец методом трансплантации и криоконсервации эмбрионов, а также для ускоренного воспроизводства высокоценных генотипов. В настоящее время разными исследователями рекомендуется для вызывания полиовуляции применять различные гормональные препараты с различной очисткой (ФСГ, ГСЖК, СЖК и др.). Практика показывает, что наиболее экономически выгодным препаратом является сыворотка жеребых кобыл СЖК). Однако, суперовуляторная реакция яичников у овцематок-доноров на гормональный препарат СЖК различна и главной причиной столь большой вариабельности результатов гормональной обработки, по нашему мнению, являютсясмешивание сывороток нескольких жеребых кобыл при изготовлении препарата с указанием только усредненной гормональной активности, т.е. не использование для стимуляции суперовуляции индивидуальных сывороток крови, полученных от отдельных кобыл, не учет соотношения ФСГ и ЛГ каждой индивидуально приготовленной серии СЖКне установление гормонального статуса донора перед обработкойотсутствие объективных данных о том,насколько эти стимулирующие гормоны сочетаются в организме донора после введения препарата СЖК. Это указывает на не изученность до настоящего времени в едином комплексе влияния биологических качеств сывороток жеребых кобыл и крови донора по соотношению фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов на репродуктивные функции яичников. Бесспорно, результаты таких исследований на сегодняшний день представляют большой интерес не только для трансплантации эмбрионов особо редких и исчезающих окрасок каракульских овец,но и могут послужить основанием в перспективе для поисковых исследований по сохранению генетических ресурсов других сельскохозяйственных животных. Поэтому разработка эффективной схемы гормональной индукции суперовуляции каракульских овец при трансплантации их эмбрионов на основе установления гормональных статусов индивидуумов является актуальной проблемой в технологии трансплантации эмбрионов. Известные способы гормональной обработки овец препаратом СЖК в сочетании с витаминами (А и Е) и простагландином, а также учета живой массы донора совершенно не учитывают соотношений между фолликулостимулирующим(ФСГ) и лютеинизирующим (ЛГ) гормонами, как в препарате сыворотки жеребых кобыл (СЖК), так и в крови доноров в период полового цикла. (Сергеев Н.М.,Мазепкин С.А., Ефремова М.И. Методические рекомендации по трансплантации эмбрионов у овец. 2 Всесоюзный научно-исследовательский институт животноводства. Дубровицы, 1988. С. 4-8 Алибаев Н., Бекетауов О. и др. Рекомендации по трансплантации эмбрионов у каракульских овец. - Шымкент, 1997.С.7-14) Задача изобретения - разработка способа гормональной обработки доноров каракульских овец, в котором учитывается комплексная оценка гормонального статуса индивидуумов (овцематка и кобыла-донор),с применением дешевого отечественного препарата СЖК, участвующего в повышении репродуктивных функций яичников доноров В способе гормональной стимуляции суперовуляции овцематок-доноров каракульской породы определяют соотношение фолликуло стимулирующего и лютеинизирующего гормонов в сыворотке жеребых кобыл и крови овцематокдоноров после прихода в охоту, после чего осуществляют введение сыворотки жеребых кобыл овцематкам-донорам, при этом овцематкам-донорам с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 11 вводят сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 31 на 10-й день эстрального цикла - в дозе 12 МЕ/кг, на 11 день - в дозе 7 М Е/кг, на 12-й день - сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 21 в дозе 7 МЕ/кг и через 24 часа после последнего введения на 13-й день полового цикла вводят сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 11 в дозе 12 МЕ/кг, овцематкамдонорам с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 21 вводят сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 31 на 10-и день эстрального цикла - в дозе 12 МЕ/кг, на 11-й день сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 21 в дозе 7 МЕ/кг, на 12-й день сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 11 в дозе 7 МЕ/кг на 13-й день сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 11 в дозе 12 МЕ/кг, овцематкам донорам с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 11 вводят сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 31 на 10-й день эстрального цикла в дозе 12 МЕ/кг,на 11-й и 12 дней фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 11 по 7/кг и на 13-й день - сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 11 в дозе 12 МЕ/кг. 14759 На 12-й день - 11, а для доноров третьей группы на 10-й день после выборки - 31, на 11 и 12-е дни 11. На 13-й день полового цикла всех доноров обрабатывают повторно препаратом СЖК с соотношением ФСГ/ЛГ - 11 в дозе 12 МЕ/кг живой массы и через 3-5 дней после осеменения производят хирургическую операцию для извлечения у них эмбрионов. В традиционную технологию трансплантации эмбрионов введены новые элементы усовершенствования предложена 4-х дневная схема индукции суперовуляции взамен однодневной,учитывающая соотношения ФСГ/ЛГ в инъецируемых препаратах СЖК и в крови донора после выявления в охоте, причем первые три дня последовательно вводят серии сывороток с различным содержанием гормонов в убывающих дозах в зависимости от концентрации ФСГ/ЛГ в крови доноров, а на 4-й день первоначальную дозу сыворотки с равным соотношением в нем стимулирующих гормонов (11) Внедрение предлагаемого способа в технологию трансплантации обеспечивает вызывание стабильной суперовуляции и позволяет получить максимальное количество полноценных жизнеспособных эмбрионов, которые гарантируют сохранение и ускоренное размножение особо редких и исчезающих оригинальных окрасок, расцветок цветных каракульских овец с наименьшими затратами. Преимущество данного способа по сравнению с традиционным заключается в следующемсбалансирует необходимое соотношение между ФСГ и ЛГ в организме донора, что позволит синхронную овуляцию фолликулов в обоих яичникахпозволит исключить появление кистозных фолликул после обработкиповысит уровень суперовуляции в 3 раза,оплодотворяемость яйцеклетокв 1,3 и выхода нормальных эмбрионов - в 2,2 разаисключит использование дорогого и дефицитного гормона простагландинапозволит максимально использовать встречающиеся в популяциях единичные экземпляры экзотических животных, не нарушая их репродуктивные функции яичников. Пример. С целью разработки более дешевого и эффективного способа индукции суперовуляции у каракульских овец редких и исчезающих окрасок в начале нами изучены сыворотки крови 7 жеребых кобыл, и для опыта отобраны 3 серии препарата СЖК с различными соотношениями ФСГ и ЛГ - 31 21 и 11. Одновременно для определения гормонального фона каждого донора кровь взята у 15 голов овцематок после прихода в охоту. Таблица 1 Содержание гормонов в крови доноров после прихода в охоту в МЕд/л Индивидуальный номер донора левое ухо правое ухо 06589 2265 06689 07915 0181 07667 2752 06652 2223 06962 2229 07922 02711 06907 06622 05437 06489 05424 07124 7628 2230 07522 2214 2219 07343 окраска донора Сур бухарская Серая Коричневая Сур каракалпакская Бежевая Светло-коричневая Серая Серая Сур бухарская Сур каракалпакская Сур каракалпакская Сур бухарская Коричневая Сур бухарская Сур каракалпакская Результаты исследований показывают, что величина содержания ФСГ и ЛГ в сыворотке крови у всех доноров неодинакова и имеет высокую вариабельность в соотношении фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов. Уровень ФСГ находится в пределах от 3,0 МЕд/л до 8,7 МЕд/л, а лютеинизирующего гормона от 1,2 МЕд/л до 5,1 МЕд/л. Полученные данные также показывают, что среди изученных 15 голов доноров частота встречаемости соотношения ФСГ/ЛГ в пределах 11 составила 26,7, а содержание фолликулостимулирующего гормона в содержание гормонов ФСГ ЛГ 5,5 1.5 5,4 2,4 3,0 1,2 5,1 5,0 5,6 2,6 6,1 2.8 5,4 5,1 6,6 2,0 5,7 4,4 6,7 4,8 8,0 2,3 8,7 2,7 6,0 1,9 6,5 зо 5,8 1,8 крови у 11 голов доноров находилось на высоком уровне 21 и 31 и соответственно составило 33,3 и 40,0. Таким образом, анализируя данные, полученные при определении ФСГ и ЛГ в крови доноров в период полового цикла, следует отметить, что у каждого донора гормональный фон индивидуален. Это говорит о том, что такую индивидуальногормональную особенность можно эффективно использовать при трансплантации эмбрионов каракульских овец редких и исчезающих окрасок. 3 14759 известных способов гормональной обработки овец,на 11 день полового цикла им вводили подкожно однократно-ударную дозу СЖК в расчете на один кг живой массы донора 26 , а овцам контрольной четвертой группы в те же сроки инъецировали аналогичную дозу сыворотки жеребых кобыл без учета соотношения ФСГ и ЛГ как донора, так и препарата сыворотки. Донорам опытной и контрольной группы через 48 часов после введения препарата СЖК вводили простагландин в дозе 250 мкг на донора. Гормональная обработка доноров осуществлялась по следующей схеме Для стимулирования развития фолликулов и их овуляций в яичниках, а также повышения выхода нормальных эмбрионов у каракульских овец разных окрасок, нами проведены серии опытов, где учитывалось соотношение ФСГ и ЛГ в препарате СЖК и в крови донора. Первый опыт. В этом опыте участвовали четыре донора овцематка-донор с соотношением ФСГ и ЛГ в крови 11 (первая группа) овцематка-донор с соотношением ФСГ и ЛГ в крови - 21 (вторая группа) и овцематка-донор с соотношением ФСГ и ЛГ в крови - 31 (третья группа). Все эти 3 группы доноров были опытными и согласно схемы дни эстрального цикла 11 11-й 11 13-й последующие дни на 4-7 день после осеменения Результаты таблице 2. 21 31 без учета СЖК с соотношением ФСГ и ЛГ 21 31 без учета простагландин охота и осеменение извлечение эмбрионов гормональной обработки опытных и Уровень овуляции в зависимости от соотношения ФСГ/ЛГ в крови донора и в препарате СЖК при однократно-ударной дозе. показатели уровень суперовуляции неовулировавших фолликулов, шт в т.ч гипертрофированные фолликулы, шт У доноров контрольной группы, в яичниках было в среднем по 5,0 фолликулов и небольшое количество овулировавших фолликулов, тогда как в яичниках доноров опытной группы было в среднем по 8,32,73 фолликул и 4,31,22 овуляций, что больше на 3,3 и 1,6 штук соответственно по сравнению с контрольными группами. Существенные различия между опытными группами прослеживались по уровню соотношения ФСГ/ЛГ в крови донора и дозы СЖК. При этом доноры 1 опытной группы имели значительно меньшее число фолликулов (3 шт.) и наоборот, несколько большее число овуляций (66,7) по сравнению с этим показателем у доноровиопытной группы(60,0 и 41,7). Эта разница в числе фолликулов и овуляций у донорови-опытных групп объясняется главным образом различиями в соотношении ФСГ/ЛГ в крови и введенных препаратов СЖК. Подтверждением этому является то, что уровень суперовуляции в яичниках доноров 4 в среднем опытная контрольна я 3 1 8,32,73 5,0 4.31.22 3.0 52.0 60.0 низкий 4,01,73 2 0,7 16,7 при введении СЖК в соотношениях 21 - 21 и 31 31 был средним, а при варианте инъекции 11 - 11 и у контрольной группы оказался низким. Здесь в зависимости от уровня суперовуляции в яичниках,доноров разделили на низкие - до 6-ти овуляций средние - 6 - 7 , высокие - 8-9 и очень высокие - 10 и свыше овуляций. Однако следует отметить, что при повышении в дозе СЖК и в крови донора фолликулостимулирующего гормона у части фолликулов в яичниках наблюдалось образование не лопнувших гипертрофированных (кистозных) фолликулов. Например, при обработке препаратом в тех же соотношениях, что и у донора выявлены патологически гипертрофированные фолликулы в количестве 2 штук, что составило 28,6 и 16,7 от общего числа фолликулов данного донора. Эти результаты свидетельствуют о проявлении более сильной и длительной активности инъекции 14759 ФСГ/ЛГ в соотношениях 31 - 31, чем другие варианты инъекций. Таким образом, в этих экспериментах, прежде всего, было установлено, что высокое содержание фолликулостимулирующего гормона в плазме крови донора и введенных им препаратах, способствует усилению роста и созреванию фолликулов и с другой стороны задерживает овуляторную реакцию яичников. Наоборот, с уменьшением ФСГ в крови донора повышается преждевременный овуляторный эффект, что препятствует росту и созреванию остальных фолликулов, то есть снижает уровень суперовуляции. Принимая во внимание роль соотношения ФСГ и ЛГ как стимулятор роста и овуляций фолликулов,нами проведен второй эксперимент. Опыт второй. Главная цель этого опыта - выбор оптимального варианта обработки доноров на основе установления влияния на уровень суперовуляции и выявления нежелательных последствий - фолликулярные кисты яичников при однократно-ударной дозе введения препарата СЖК. Убедившись в том,что фолликулостимулирующий гормон стимулирует развитие фолликулов в яичниках,а лютеинизирующий гормон участвует в овуляции фолликулов, нами, во - втором опыте, использована другая схема вызывания полиовуляции с применением разных вариантов инъекций гормонального препарата СЖК в зависимости от соотношения ФСГ/ЛГ как в дозе СЖК, так и в крови донора. При этом гормональная обработка доноров проводилась согласно схеме 2. Схема 2. Схема гормональной обработки доноров в зависимости от соотношения ФСГ/ЛГ в дозе СЖК и в крови доноров. день астрального цикла донора 11-й 13-й последующие дни на 4-7 день после осеменения Результаты испытания влияния различных соотношений ФСГ/ЛГ в препаратах и в крови доноров на уровень суперовуляции приведены в таблице 3. Таблица 3 Влияние различных соотношений ФСГ/ЛГ в препаратах СЖК и в крови донора на овуляцию показатели обработано доноров, гол. всего фолликулов, шт число овуляций, шт. уровень суперовуляции неовулировавшие фолликулы, шт соотношения ФСГ и ЛГ 31 -11 31 -21 21 -31 1 1 1 9 14 12 7 10 9 77,8 71,4 75,0 средний очень высокий высокий 2 4 3 Реакция яичников доноров с различным соотношением ФСГ/ЛГ в крови на инъекции трех препаратов СЖК, в первом и во втором из которых соотношение ФСГ/ЛГ составили 31, а в третьем 21, отличалась индивидуальной вариабельностью. Количество овуляций в первом варианте инъекции составило 7 шт., во втором - 10 шт. и в третьем - 9 шт. Установлено, что препарат СЖК с высоким показателем соотношения ФСГ/ЛГ (31) вызывает более интенсивную овуляцию у доноров с низким соотношением ФСГ/ЛГ (11 и 21) соответственно от 71,4 до 77,8. Третий вариант инъекции - 21 - 31 имел промежуточное положение (75,0). При этом уровень суперовуляции доноров первой группы в среднем на донора 11,71,46 8,70,90 3,00,58 оказался средним, второй группы - очень высоким, а гормональный статус доноров третьей группы высоким. В целом, по суммарному числу овулировавших фолликулов, доноры второй подопытной группы на 5,7 штук превосходят животных контрольной и 4,4 штук первой опытной группы. Причем число неовулировавших фолликулов сократилось на 25,0 по сравнению с результатами первой схемы. Анализ диаметра фолликулов в яичниках подопытных животных дает более четкое представление о степени эффективности трех вариантов обработок на 11-й день полового цикла при однократно-ударной инъекции препаратом СЖК в дозе 26 МЕ/кг живой массы донора (табл. 4). 14759 Таблица 4. Распределение фолликулов по размеру в зависимости от вариантов инъекции СЖК. Варианты инъекции СЖК числ с учетом ФСГ/ЛГ донора о фолли в препарате в крови кул о в СЖК донора 31 31 21 В среднем размеры фолликулов мелкие до 5 мм В результате морфологических исследований в двух из трех вариантов обработок 31 - 21 и 21 - 31 в основном находили фолликулы крупного диаметра, что составило 57,13,2 и 58,314,2 процентов. В то же время среди крупных фолликулов выявлены гипертрофированные,которые соответственно составили 37,5 и 42,9. Такое сочетание соотношений ФСГ и ЛГ ведет к образованию неовулиро-ванных больших по размеру кистозных фолликулов, что существенно снижает эффективность гормональной обработки препаратом СЖК. При введении СЖК с соотношением 31 к донорам 11 выявлены в основном мелкие - до 55,6 и средние - 33,3, а крупных фолликулов всего составило 11,1, причем среди них не обнаружены кистозные фолликулы, что необходимо учитывать при сочетании соотношений ФСГ/ЛГ препарата СЖК и донора. Таким образом, однодневная гормональная обработка доноров с соотношением ФСГ/ЛГ 31 и 21 с препаратом СЖК в тех же соотношениях на 11 й день астрального цикла и через 48 часов простагландином по 250 мкг на донора имеет свою негативную сторону сопровождается увеличением и образованием разной величины фолликулов, что препятствует появлению синхронной их овуляции. Для исключения нежелательных последствий однодневно-ударных доз СЖК и усиления синхронности овуляции в яичниках проведены эксперименты по многоразовым инъекциям СЖК с учетом соотношения ФСГ/ЛГ в вводимых дозах и в крови донора. Опыт третий Цель опыта - разработка нового эффективного способа индукции синхронизированной суперовуляции у доноров каракульских овец редких и исчезающих оригинальных окрасок и расцветок. Учитывая, что не все индуцированные к росту фолликулы овулируют из-за недостатка лютеинизирующего гормона в крови донора, в третью схему обработки включили СЖК, имеющие в своем составе различные соотношения ФСГ/ЛГ. При этом нами применена трехдневная схема введения различных типов СЖК, включающая однократную инъекцию в день в убывающих дозах с учетом соотношения ФСГ/ЛГ у донора, чтобы быстро инактивировалась в организме донора введенная доза препарата. На 13-й день полового цикла донорам повторно инъецируется СЖК с соотношением ФСГ/ЛГ 11 для синхронизации овуляций в яичниках донора. Таблица 5. Схема гормональной обработки овец-доноров при соотношении ФСГ и ЛГ в их крови 11 дни цикла 10-й 11-й 12-й 13-й последующие дни через 3-5 дней после осеменения Таблица 6 Схема гормональной обработки овец-доноров при соотношении ФСГ и ЛГ в их крови 21 дни цикла 10-й 11-й 12-й 13-й последующие дни через 3-5 дней после осеменения 6 14759 Таблица 7 Схема гормональной обработки овец доноров при соотношении ФСГ и ЛГ в их крови 31 дни цикла 10-й 11-й 12-й 13-й последующие дни через 3-5 дней после осеменения При этом в период с 10-го по 12-ые сутки эстрального цикла в течении трех суток в последовательности вводили рекомендуемую дозу СЖК с разным соотношением в них ФСГ и ЛГ. Например, к донорам с соотношением ФСГ и ЛГ в крови 11 (1 группа) на 10-й день полового цикла вводили подкожно препарат СЖК в соотношениях 31 в дозе - 12 МЕ/кг живой массы, а на 11-12 день соответственно 31 и 21 по 7 МЕ/кг (схема 5). Для донора (2 группа), которая имела соотношение ФСГ и ЛГ 21 соответственно 31 - 21- 11 (схема 6) и на донора ФСГ и ЛГ 31(3 группа) 31 - 11 - 11 (схема 7). На 13-й день полового цикла(24 часа) всем повторно вводили подкожно СЖК с соотношением ФСГ/ЛГ 11 по 12 МЕ/кг живой массы донора. Данная схема обработки позволила увеличить число овуляций в среднем до 84,2, т.е. на одного донора приходилось по 10,71,58 штук (табл. 8). Уровень суперовуляции доноров обработанных по пятой и седьмой схемам были очень высокими, а у доноров инъецированных препаратом СЖК согласно шестой схеме - высоким. В целом данная схема оказывает высокий стимулирующий эффект. Таким образом, разработана новая схема гормональной индукции суперовуляции для трансплантации каракульских овец,способствующая увеличению числа зрелых фолликулов на 12,7 штуки и тем самым повышает эффективность суперовуляции. Таблица 8 Результаты применения новой схемы гормональной обработки для индукции суперовуляции показатели Обработано доноров, гол. Соотношение ФСГ/ЛГ в крови Всего фолликулов, шт Из них овулировавших, шт Уровень суперовуляции неовулировавшие фолликулы в т.ч. кистозные 1 1 1 11 21 31 13 11 14 11 9 12 84,6 81,8 85,7 очень высокий высокий очень высокий 15,4 18,2 14,3 Для определения объективности полученных результатов в ходе эксперимента методом дисперсионного анализа пропорциональных двухфакторных комплексов для качественных признаков вычислили влияние кратности обработки и соотношения ФСГ и ЛГ уровень суперовуляции и их достоверности (табл. 9). Таблица 9 Дисперсионный анализ влияние кратности обработки и соотношения ФСГ И ЛГ на уровень суперовуляции изучаемые факторы Кратность обработки Соотношение ФСГ и ЛГ доля влияния факторов и ее ошибка 20,2190,010 20,2120,011 Данные таблицы показывают, что влияние кратности обработки доноров препаратом СЖК и учет соотношения ФСГ и ЛГ в инъецируемых дозах и в крови донора на рост фолликулов и синхронную овуляцию очень высокое и данный показатель составляет соответственно 20,2190,010 и 0,2120,011 с достоверностью 20,26 и 9,94 (Р 0,001). Доверительные границы генерального показателя составляет от 16,8 до 21,5. В результате дисперсионного анализа установлено, что каждый изученный фактор в отдельности повышает овуляторную реакцию не 7 14759 менее 16,8 и является новым элементов в индукции суперовуляции каракульских овец редких Уровень суперовуляции при применении разных способов обработки опыты уровень суперовуляции средний высокий 33,7 33,3 33,3 33,3 Суперовулировавший эффект при применении разных способов обработки не одинаковый. Например, доноры первой опытной группы имели низкий (66,7) и средний (33,3) уровень суперовуляции, причем ни один донор не проявил высокий уровень суперовуляции (табл. 10). У доноров второй опытной группы уровень суперовуляции распределился в равных количествах, т.е. по 33,3. При применении предлагаемого способа обработки, ответная реакция яичников у доноров была высокой. При этом высокий уровень суперовуляции составил 33,3, а очень высокий 66,7. Известно, что степень внедрения любых разработанных приемов, прежде всего, зависит насколько они являются эффективными по сравнению с традиционными. Таблица 11 Эффективность разных способов обработки доноров препаратом СЖК уровень суперовуляции высокий очень в среднем высокий 16,7 33,3 Результаты проведенных исследований позволяют с большой достоверностью утверждать о высокой эффективности предлагаемого способа вызывания суперовуляции по сравнению со способом введения СЖК однодневно-ударными дозами (табл. 11). Причем рекомендуемая новая схема повышает уровень суперовуляции на 66,6 или 3 раза выше, чем способ при однодневноударной дозе, а оплодотворяемость яйцеклеток и нормальных эмбрионов соответственно на 18,9 и 4,2 шт. или 1,3 и 2,2 раза выше. Таким образом, в результате исследований, в традиционную технологию трансплантации эмбрионов введены элементы усовершенствования предложена четырехдневная схема индукции суперовуляции препаратом СЖК взамен однодневной, позволяющая исключить появление кистозных фолликул после обработки, повысит уровень суперовуляции в 3 раз, оплодотворяемость яйцеклеток - в 1,3 и выхода нормальных эмбрионов- в 2,2 раза. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ гормональной стимуляции суперовуляции овцематок-доноров каракульской породы, включающий гормональную обработку,8 отличающийся тем, что определяют соотношение фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов в сыворотке жеребых кобыл и крови овцематок-доноров после прихода в охоту, после чего осуществляют введение сыворотки жеребых кобыл овцематкам-донорам, при этом овцематкамдонорам с соотношением фолликулостимулирующего и лютеиностимулирующего гормонов 11 вводят сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 31 на 10-й день эстрального цикла в дозе 12 МЕ/кг, на 11-й день - в дозе 7 МЕ/кг, на 12-й день- сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 21 в дозе 7 МЕ/кг и через 24 часа после последнего введения на 13-й день полового цикла вводят сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 11 в дозе 12 МЕ/кг, овцематкам-донорам с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 21 вводят сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 31 на 10-й день - эстрального цикла в дозе 12 МЕ/кг, на 11-й день - сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 21 в дозе 7 МЕ/кг, 14759 на 12-й день - сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 11 в дозе 7 МЕ/кг, на 13-й день - сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 11 в дозе 12 МЕ/кг,овцематкам-донорам с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 1 1 вводят сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 31 на 10-й день эстрального цикла в дозе 12 МЕ/кг, на 11-й и 12-й дни - с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 11 по 7 МЕ/кг и на 13-й день - сыворотку жеребых кобыл с соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов 11 в дозе 12 МЕ/кг.