Штамм бактерий Escherichia coli 64, используемый для изготовления эффективного ветеринарного пробиотического препарата против кишечных инфекций молодняка сельскохозяйственных животных и птиц

(51) 12 1/20 (2010.01) 61 39/108 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ И ПТИЦ(57) Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к ветеринарной микробиологии и может быть использовано для профилактики кишечных инфекций. Целью изобретения является получение штамма 64 обладающий адгезивной способностью,высокой антагонистической активностью по отношению, к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам, который может быть использован для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний новорожденного молодняка животных и птиц.(72) Бияшев Кадыр Бияшевич Киркимбаева Жумагуль Слямбековна Ермагамбетова Светлана Емлсовна Жумашева Жанна Манаповна(56) Сборник научных трудов МНИИЭМ.-М. 1986(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ 64, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОГО ВЕТЕРИНАРНОГО ПРОБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ПРОТИВ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ МОЛОДНЯКА 23876 Изобретение относится к биотехнологии, в частности к ветеринарной микробиологии, и может быть использовано для профилактики кишечных заболеваний у новорожденного молодняка сельскохозяйственных животных и птиц. Известно, что для профилактики желудочнокишечных заболеваний молодняка животных используются молочнокислые, пропионовокислые бактерии и бифидобактерии(Микрофлора пищеварительного тракта молодняка сельскохозяйственных животных. Кишинев, 1990,190 с. Тимашко М.А.). Однако с нестандартностью жидких форм препаратов, непродолжительным сроком их хранения и отсутствием массового промышленного производства они не нашли широкого применения в практике животноводства. Известен штаммВ 379 М,используемый для изготовления пробиотического препарата, предназначенный для медицинской практики и применяемый в ветеринарии ( Сборник научных трудов МНИИЭМ. - М. 1986). Пробиотические препараты на основе микроорганизмов родаявляются видоспецифичными для того объекта, от кого они выделены. Известно, что род бифидобактерии объединяет 24 вида. Одни виды обитают только у животных определенных видов, другие - у животных многих видов, третьи - у животных и человека, четвертые - только у человека. Соответственно способность заселять кишечник у человека, животных или птиц различна. При селекции штаммов для пробиотиков учитывают эти и многие другие биологические свойства. Поэтому физиологическая активность и терапевтическая эффективность разных препаратов зависит от состава штаммов, технологии производства. Препараты,включающие лакто и бифидобактерии, могут быть неэффективны если производятся на основе медицинских или фармокологически неактивных в кишечнике животных и птицы штаммов микроорганизмов. Недостатком штаммаВ 379 М является узкий спектр антагонистической активности (проявляет только по отношению к шигелам и стафилококкам),не обладают способностью к адгезии на эпителии и приживанию в пищеварительном тракте, что значительно снижает лечебно-профилактическую эффективность препарата. Задачей изобретения является штамм 64 обладающий адгезивной способностью,высокой антагонистической активностью по отношению к большинству условно-патогенных и патогенных микроорганизмов, используемый для изготовления эффективного ветеринарного пробиотического препарата против кишечных инфекций молодняка сельскохозяйственных животных и птиц Штамм 64 получен направленной селекцией выделенной культуры от здоровых ягнят. Штамм 64 депонирован в коллекции микроорганизмов Научноисследовательского сельскохозяйственного института Национального центра по биотехнологии Республики Казахстан и зарегистрирован под номером 45 -95. Штамм.64 характеризуется следующими признаками и свойствами. Морфологические признаки Клетки штамма короткие палочки (1,1-1,6)(2,05,9) мкм, подвижные, грамотрицательные, спор и капсул не образуют. Культуральные свойства. Бактерии штамма при росте на мясопептонном агаре через 24 ч образуют гладкие, выпуклые,круглые, блестящие, полупрозрачные колонии серого цвета с ровным краем, на среде Эндо через 24 ч - круглые колонии темно-красного цвета с металлическим блеском. При культивировании в жидких средах - бактерии штамма через 18 ч образуют равномерное помутнение. Физиолого-биохимические признаки Диапазон температур роста 37-39 С,оптимальная температура 37 С. Оптимум рН 6,8-7,5. В качестве источника углерода используют глюкозу,лактозу, мальтозу, арабинозу, маннит, сорбит,сахарозу, дульцит, салицин. Образует индол и не образует сероводород. Обладает лизин - и орнитиндекарбоксилазной активностью, не обладает уреазной активностью. Не разжижает желатин. Антигенная структура Типичная для.0-группа 111, с адгезинами 41 и К 99. Патогенные свойства Культура .64 не вызывает заболевания гибели белых мышей при внутрибрюшинном и пероральном введении 24-часовой культуры штамма 64 в дозах 105, 107 и 109 КОЕ. Штамм Е.64 антагонистически активен в отношении следующих тест - культур . , .. Пример 1. Изучают антагонистическую активность культуры 64 и штамма сравнения В.В 379 М. Культуру 64 выращивали на жидкой среде (МПБ) в термостате 16-18 ч при 37-38 С. Культуру В 379 М выращивали на кукурузно-лактозной среде. Затем антагонистическую активность определяли микробиологическим способом - методом диффузии в агар (метод лунок). В чашках Петри, засеянных тест-культурами, сделали лунки. В лунки вносили штаммы 64 и В 379 М из расчета 1,0 см 3 . Чашки выдерживали в термостате при 37 С в течение 18-24 часов. Измеряли диаметр отсутствия роста тесткультур. Результаты определения антагонистической активности штаммов.64 и.В 379 М приведены в таблице 1. Зона задержки тест культур, в мм,23,8 14,524,5 16,418,5 12,617,9 13,5 Из материала таблицы видно, что штамм 64 ПРИМЕР 3. Препарат из штамма.64 подавляет рост всех исследованных тест-культур, приготавливают путем выращивания в аппарате для причем зоны подавления роста большинства из них культивирования микроорганизмов(АКМШ). больше, чем при штамме В 379 М. Это Выращивание культуры в аппарате в течение 16-18 ч свидетельствует о более высокой антимикробной при 37-38 С с аэрацией, после чего производят смыв активности предлагаемого штамма.64. культуры средой для высушивания, содержащей ПРИМЕР 2. Изучение сроков персистирования желатин 1,5-2, сахарозу 10,рН 7,4-8,0. После предлагаемого и штамма бифидобактерий в проверки полученной микробной массы на чистоту кишечнике животных. и типичность роста ее доводят до концентрации 10 Длительность персистирования бактерий в млрд. КОЕ в 1 мл по стандарту мутности ГИСК им. организме обусловлена способностью штамма Тарасевича. Полученную массу разливают во прикрепляться к стенке кишечника и размножаться флаконы объемом 4,0 см 3, подвергают лиофильной в пристеночном слое или кишечном содержимом. сушке до получения сухого продукта - пробиотика. Формируют три группы беспородных белых Сохраняют препарат при температуре 4-6 С. Срок мышей массой 14-16 г, по 20 голов в каждой группе. годности 12 месяцев. На кукурзно-лактозной среде выращивают Пример 4. Для изучения эффективности двухсуточную культуру штамма В 379 М, культуру препарата из штамма.64 бактериальную штамма 64 выращивают на МПА. Выросшие взвесь, приготовленную для высушивания, разводят культуры штаммов В 379 М и 64 по оптическому стерильным физиологическим раствором до стандарту мутности доводят концентрацию до концентрации 10 7 КОЕ в 1 мл. Антагонистическую значения 109 КОЕ. активность штамма.64 изучали на Первой группе мышей вводят однократно новорожденных телятах, ягнятах, поросятах и перорально по 0,5 мл культуры штамма Е.64, цыплятах путем однократной пероральной второй группе - культуру штамма .В 379 М выпойкой животных в дозах соответственно в том же объеме. Третью группу мышей используют 40109, 5109, 5109 и 109 КОЕ. Спустя 24 часа всем в качестве контрольной, которой вводят в том же опытным и контрольным животным вводили объеме физиологический раствор. По 5 мышей перорально вирулентную культуру эшерихии в каждой из трех групп убивают через 12 часов, 24 оттитрованной смертельной дозе. Все подопытные часа, через 2 и 3 суток после введения культур животные выжили, при падеже контрольных. В 379 М и 64. Вскрывают кишечники мышей,Таким образом, штамм.64 обладающий отбирают участки тонкого и толстого отделов адгезивной способностью,высокой кишечника и делали посевы на питательные среды. антагонистической активностью по отношению к Посевы выдерживают в термостате при 37 С в патогенным и условно-патогенным течение 24 ч. микроорганизмам, который может быть использован По окончании культивирования отмечают пробы для профилактики и лечения желудочно-кишечных с наличием колоний, типичных для бифидобактерий заболеваний новорожденного молодняка животных и эшерихии. Результаты подтверждают и птиц. микроскопией мазка, окрашенного по Граму. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Положительным считается результат при наличии в посевах хотя бы одной колонии Штамм бактерий 64,исследуемых культур. За 100 берется значение при депонированный в Национальном центре по высеваемости бифидобактерий и эшерихии от 5 биотехнологии Республики Казахстан Научномышей в каждом определении. Опыт проводят в исследовательский сельскохозяйственный трех повторениях. институт, под регистрационном номером 45-95,Штамм .64 обладает большей используемый для изготовления эффективного приживаемостью в кишечнике белых мышей, чем ветеринарного пробиотического препарата против штамм В.В 379 М, что установлено по кишечных инфекций молодняка срокам его выделения из кишечника и кишечного сельскохозяйственных животных и птиц. содержимого. 3