Способ изготовления тотальных препаратов гельминтов

МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ внутренние структуры плоских и первичнополостных червей и обеспечивающих оптимальный для восприятия цвет объекта, а в качестве заливочной среды - натуральный или искусственный мед. Изготовление препаратов гельминтов осуществляется следующим образом. Объект помещается в продажный или разбавленный водой в объемном соотношении 11-12 раствор лекарственного препарата Азидин или Неозидин на срок от 1-2 часов до нескольких суток до достижения им насыщенного оранжевого цвета при возможности более длительной экспозиции. После извлечения объекта из красителя его ополаскивают водой, помещают на предметное стекло в каплю жидкого натурального или искусственного меда,при объемном соотношении объекта и меда 12,5-3,накрывают покровным стеклом так, чтобы все пространство под покровным стеклом было заполнено заливочной средой, без пузырьков воздуха. Через 2-5 дней (в зависимости от величины объекта и толщины слоя заливочной среды) происходит застывание покровного стекла на предметном с фиксацией препарата и полное просветление тканей и внутренних структур гельминта.(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Павлодарский государственный педагогический институт Министерства образования и науки Республики Казахстан(56) Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды Справочник. - М. Колос, 1983. с.208. с.196-197(54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ТОТАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ ГЕЛЬМИНТОВ(57) Изобретение относится к области биологии и музейного дела, в частности, к способам изготовления препаратов биологических объектов для научных и учебно-методических целей. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в расширении арсенала способов и средств для изготовления тотальных препаратов гельминтов, обеспечивает возможность изготовления окрашенных препаратов не только плоских, но и первичнополостных червей,предполагает использование доступных готовых веществ в качестве красителей - ветеринарных препаратов Азидин или Неозидин, обладающих консервирующим эффектом, прокрашивающих Изобретение относится к области биологии и музейного дела, в частности, к способам изготовления препаратов биологических объектов для научных и учебно-методических целей. Известен способ изготовления тотальных препаратов плоских червей путем окрашивания тела гельминтов квасцовым кармином, с последующим обезвоживанием за счет проведения через ряд спиртов возрастающей концентрации (от 50 до 96 и 100), просветлением в гвоздичном масле и заключением в канадский или пихтовый бальзам Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды Справочник. - М. Колос, 1983. с.208. с.196-197. Недостатком известного способа и других его аналогов является определенная трудоемкость,сопряженная с необходимостью специального изготовления красителя (который может храниться непродолжительное время и в условиях холодильника) и заливочной среды. Кроме того, с помощью данного способа, как и большинства ранее известных, возможно изготовление окрашенных препаратов только плоских червей. Нематоды с их полунепроницаемой кутикулой недоступны для окрашивания большинством красителей. Задачей изобретения является разработка способа получения окрашенных препаратов всех классов гельминтов с использованием готовых и доступных веществ в качестве красителя и заливочной среды для хранения постоянного препарата. Для решения поставленной задачи предлагается использовать в качестве красителя ветеринарные препараты, содержащие производные азина и азона(Азидин, Неозидин), а в качестве заливочной среды - натуральный или искусственный мед. Эти препараты имеются в продаже в ветеринарных клиниках и аптеках, безвредны для работающих, не поступают в организм аспирационным путем,имеют длительный срок хранения,могут использоваться для окрашивания объектов в продажной концентрации или в разбавленном виде. Натуральный и искусственный мед доступен в любое время года. Натуральный мед лучше всего использовать в течение летних и осенних месяцев,пока он имеет удобную для применения жидкую консистенцию. Мед обладает хорошими просветляющими свойствами в отношении как обезвоженных, так и необезвоженных объектов,бактерициден (за счет естественных бактерицидных факторов и осмоанабиоза), обеспечивает прочную фиксацию покровного стекла на объекте, застывая в течение 2-4 дней. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в расширении арсенала способов и средств изготовления тотальных препаратов гельминтов, обеспечивает возможность изготовления окрашенных препаратов не только плоских, но и первичнополостных червей, а также имеет ряд экономических,технических и организационных преимуществ. Окраска зоологических объектов препаратами Азидин или Неозидин обеспечивает яркий 2 оранжево-красный или оранжево-желтый цвет объекта и его внутренних структур, удобный для восприятия. Переокрашивание гельминта или затемнение внутренних органов исключено при любой экспозиции в красителе, даже длительной. Названные лекарственные препараты хорошо дифференцируют внутренние органы не только плоских, но и первичнополостных червей, в том числе скребней и нематод. Выдержка в красителе из данных лекарственных препаратов обеспечивает дополнительную консервацию объекта и предотвращает его микробную порчу при дальнейшем хранении. Сама консервирующая жидкость, даже в разбавленном виде, не подвержена бактериальному обсеменению и микробной порче,не выгорает на солнце и может храниться длительное время. Себестоимость Азидина и Неозидина невысока, что вполне целесообразно при обработке большого количества гельминтологического материала. Как свежие, так и фиксированные в любой среде объекты окрашиваются азиновыми красителями достаточно хорошо. Натуральный мед как заливочная среда одинаково хорошо подходит как для обезвоженных,так и необезвоженных объектов, обеспечивает просветление внутренних структур, является застывающей и бактерицидной средой,обеспечивающей сохранность препарата в течение нескольких десятилетий, не мутнеет и не кристаллизуется. Экономическая целесообразность использования натурального меда в качестве заливочной среды оправдана тем, что его требуется немного, срок хранения препаратов длительный, а себестоимость меда ниже, чем канадского бальзама,и не выше, чем у глицерин-желатина. Изготовление препаратов гельминтов и других зоологических объектов осуществляется следующим образом. Пример 1. Объект помещается в продажный или разбавленный водой в объемном соотношении 11 12 раствор лекарственного препарата Неозидин или Азидин на срок от 1-2 часов до нескольких суток с периодическим контролем интенсивности окраски визуально или под бинокулярной лупой. Наиболее оптимальным является достижение насыщенного оранжевого цвета, при котором обеспечивается хорошая дифференциация внутренних структур. Длительная экспозиция(несколько суток и даже недель) вполне допустима,поскольку лекарственный препарат предохраняет объект от автолиза и микробной порчи, а излишнего окрашивания и затемнения внутренних структур объекта не произойдет. Пример 2. После извлечения зоологического объекта из красителя его ополаскивают водой,помещают на предметное стекло в каплю жидкого натурального или искусственного меда при объемном соотношении объекта и меда 12,5-3,накрывают покровным стеклом так, чтобы все пространство под покровным стеклом было заполнено заливочной средой, без пузырьков воздуха. Пример 3. Через 2-5 дней (в зависимости от величины объекта и толщины слоя заливочной среды) происходит застывание покровного стекла на предметном с фиксацией препарата и полное просветление тканей и внутренних структур гельминта. В некоторых случаях для массивных объектов в тотальных препаратах требуется более продолжительное время для просветления и застывания среды. Результаты испытаний предлагаемого способа изготовления тотальных препаратов в отношении гельминтов разных классов оказались следующими. 1. Трематодыиз легких остромордой лягушки окрашивались в течение 3 часов в растворе препарата Азидин,разбавленного водой в соотношении 12. Кишечник,желточники и половая система трематод оказались хорошо дифференцированными. После помещения окрашенных экземпляров в искусственный мед на предметное стекло под покровное застывание покровного стекла и полное просветление трематод произошло через 3 дня. 2. Фрагменты цестодииз кишечника хищников окрашивались в растворе препарата Неозидин,разведенного водой 11, в течение суток. Общий цвет гельминтов - оранжевый, слегка красноватый,все структуры гермафродитных и зрелых члеников были хорошо прокрашенными, без затемнения или признаков переокрашивания. После окраски объекты были помещены в жидкий натуральный мед. Застывание покровного стекла на предметном и достаточное просветление внутренних структур гельминтов достигнуто через 4 дня. 3. Фрагменты цестодыиз рвотных масс кота были окрашены в течение 3 суток в неразведенном препарате Неозидин. Массивный гельминт был прокрашен достаточно хорошо, с дифференциацией половых комплексов и матки с яйцами. После помещения окрашенных фрагментов цестоды в натуральный мед полное застывание покровного стекла на предметном и достаточное просветление толстой стробилы достигнуто через 6-7 дней. 4. Несколько экземпляровиз кишечника домашней курицы помещены в препарат Неозидин, разбавленный водой в соотношении 12. Через 2 суток нематоды окрасились в золотисто-оранжевый цвет, с дифференциацией кишечника и матки с яйцами. После помещения 1 экз. нематоды в натуральный мед фиксация покровного стекла на предметном достигнута через 5-6 дней. Другие экземпляры нематод оставили в красителе, откуда были последовательно извлечены через 2 недели, 1 месяц, 5 месяцев. При этом отмечена хорошая сохранность гельминтов без признаков деструкции,золотисто-оранжевая окраска с хорошей дифференциацией всех внутренних структур, без признаков затемнения и избыточного окрашивания. Просветление данных экземпляров в натуральном и искусственном меде достигнуто через 4-5 дней. 5. Несколько экземпляровиз слепых отростков кишечника кур помещены в препарат Неозидин, разбавленный водой в соотношении 12. Через 1 сутки нематоды окрасились в золотисто-оранжевый цвет, с дифференциацией мужской и женской половой системы. Просветление в натуральном меде и неподвижная фиксация покровного стекла на предметном достигнута у этих мелких нематод через 2-3 дня. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ изготовления тотальных препаратов гельминтов, включающий окрашивание объекта и помещение его в заливочную среду на предметном стекле под покровным, отличающийся тем, что в качестве красителя используют лекарственные препараты Азидин и Неозидин в исходной концентрации или разбавленные водой в объемном соотношении 11 - 12, в которые объект помещают на срок от 1-2 часов до нескольких суток до достижения им насыщенного оранжевого цвета при возможности более длительной экспозиции, а в качестве заливочной среды - натуральный или искусственный мед, в которую окрашенный объект помещают на предметное стекло после ополаскивания водой при объемном соотношении объекта и меда 12,5-3, накрывают покровным стеклом так, чтобы все пространство под покровным стеклом было заполнено заливочной средой, без пузырьков воздуха, с застыванием среды через 2-5 дней.