Способ изготовления ассоциированной вакцины против чумы мелких жвачных животных и оспы овец

(51) 61 39/12 (2006.01) 12 7/00 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ АССОЦИИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ЧУМЫ МЕЛКИХ ЖВАЧНЫХ ЖИВОТНЫХ И ОСПЫ ОВЕЦ(57) Изобретение относится к области ветеринарии и биотехнологии, в частности к применению вакцинных препаратов для одновременной специфической профилактики чумы мелких жвачных животных (ЧМЖЖ) и оспы овец в угрожаемых и неблагополучных зонах. Предлагаемый способ предусматривает культивирование вирусов ЧМЖЖ и оспы овец в одной системе, определение продолжительности культивирования,подбор оптимальной стабилизирующей среды, изучена иммунизирующая доза, а также продолжительность иммунитета у животных.(72) Сансызбай Абылай Рысбайулы Баракбаев Кайнар Базаркулович Абдураимов Ергали Орынбасарович Булатов Ербол Акенович Кондибаева Жанат Буркитбаевна Таранов Дмитрий Сергеевич Ершебулов Закир Джапарович Аманова Жанат Темирбаевна Саметова Жанна Жумабековна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научноисследовательский институт проблем биологической безопасности Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан Изобретение относится к области ветеринарии и биотехнологии, в частности к приготовлению вакцинных препаратов для одновременной специфической профилактики чумы мелких жвачных животных (ЧМЖЖ) и оспы овец. Известен патент на изобретение ( 24065351,кл 61 39/295, 61 31/12, 2010, Балышева В.М.,Калантаенко Ю.Ф., Горшкова Т.Ф., Парилова С.В. г. Покров, ГНУ ВНИИВВиМ - 2009) по теме Ассоциированная вакцина против оспы овец и чумы мелких жвачных животных в которой описывается изготовление ассоциированной вакцины против оспы овец и чумы мелких жвачных животных. В работе использовали культуральные вакцинные штаммы Б/5-96 вируса оспы овец и 4537/35- вируса чумы мелких жвачных животных с активностью не менее 4,5 ТЦЦ 50/см 3. Указанные штаммы выращивают в первичных культурах клеток почки ягненка (ПЯ) и перевиваемых культурах клеток почки овцы (ПО) и гонады козы (ГК). В качестве стабилизатора используют (лактоза - 4,0, пептон - 20,0) и(сахароза - 10,0, желатин - 2,0). Вакцина обладает высокой иммуногенностью и ареактогенностью, безвредна и стабильна при хранении. Вирусвакцины против оспы овец и чумы мелких жвачных безвредны для овец и коз, создают напряженный иммунитет на 7 и 21 сутки соответственно, продолжительностью не менее 12 месяцев. Прививная доза каждого штамма составляет не менее 1000 ТЦД 50. Недостатками Российской вакцины является раздельное культивирование вирусов,что увеличивает срок наработки вируссодержащей суспензии, а также большой процент содержания стабилизирующих компонентов при составлении вакцины. Данное изобретение включает в себя разработку параметров совместного культивирования вируса ЧМЖЖ и оспы овец в культуре клеток, а также составление ассоциированной вакцины пригодной для профилактических целей в ветеринарии. Результаты, полученные в ходе выполненной работы, будут внедрены в ветеринарную практику для одновременной профилактики против двух инфекций. Отличительной особенностью от российской вакцины заключается в использовании вакцинных штаммов НИСХИ вируса оспы овец и штамма-45 вируса ЧМЖЖ. Указанные штаммы культивируют совместно с одномоментным заражением культуры клеток тестикулы ягнят (ТЯ),срок культивирования составляет 7 сут. Использование пептоно-лактозового стабилизатора в низкой конечной концентрации 3,0-2,0 соответственно. Прививная доза составляет 5001000 ТЦД 50. Разработка вакцины связана с внедрением отечественных препаратов против ЧМЖЖ и оспы овец для иммунизации овец и коз в Республике Казахстан. Внедрение данной вакцины в Республике Казахстан является актуальной задачей, решение которой позволит ввести в ветеринарную практику 2 новое средство профилактики против данных инфекций,а также для одновременной профилактики чумы мелких жвачных животных и оспы овец. Способ выполняется следующим образом Для изготовления ассоциированной вакцины использовали штамм -45 вируса ЧМЖЖ и штамм НИСХИ вируса оспы овец с инфекционной активностью не менее 5,66 ТЦД 50/см 3. Культивирование вирусов проводили в культуре клеток тестикулы ягнят (ТЯ), выращенные в матрасах стационарным методом. Монослой вышеуказанной культуры клеток инфицировали с одномоментным внесением вируса ЧМЖЖ и оспы овец в дозе 0,01 ТЦД 50/кл и выдерживали при температуре 37 С в течение 1 часа, для контакта монослоя с вирусом. После контакта монослоя с вирусом в матрасы (сосуды) с культурой клеток вносили поддерживающую среду ПСП с содержанием 2 инактивированной сыворотки КРС и культивировали в течение 7 сут. Ежедневно проводили визуальный контроль под световым микроскопом для обнаружения характерных деструктивных изменений в монослое клеток. По достижению цитопатического действия в монослое культуры клеток 75-90 матрасы замораживали в низкотемпературном холодильнике при минус 20 С в течении 18-20 час. Оттаивание проводили при комнатной температуре. Полученную вируссодержащую суспензию использовали для определения биологической активности,стерильности и приготовления ассоциированной вакцины. Биологическую активность вирусов ЧМЖЖ и оспы овец в полученных пробах определяли титрованием в культуре клеток ТЯ, по общепринятой методике с использованием специфических сывороток к данным вирусам. Титром вируса, считали наибольшее его разведение,вызывающее ЦПД в культурах клеток, который вычисляли по,Н.А. Стерильность полученной ассоциированной культуральной суспензии определяли путем высева в пробирки, содержащие такие бактериологические среды, как мясопептонный бульон, мясопептонный агар, Сабуро (жидкое и твердое). Посевы выдерживали в термостате при (370,5)С в течение 14 дней. Стерильными считали культуральные суспензии, высевы которых не давали роста посторонней микрофлоры. При изготовлении ассоциированной вакцины против ЧМЖЖ и оспы овец необходимо приготовить стабилизирующий раствор. Для приготовления 1 дм 3 стабилизирующей среды необходимо в 500 см 3 деминерализованной воды растворяют 60 г пептона и 500 см 3 деминерализованной воды 40 г лактозы. После растворения обоих компонентов растворы объединяют в одной емкости,тщательно перемешивают, доводятдо 7,3-7,4 добавлением 10 раствора гидроксида натрия . Сосуды с раствором закрывают ватно-марлевыми пробками,двукратно стерилизуют текучим паром (1001)С по 30 мин (промежуток между стерилизациями 1820 ч.), полученную стабилизирующую среду до использования сохраняют при температуре (41)С в течение 30 сут. При лиофильном высушивании ассоциированную вирусную суспензию объединяли в соотношениях 11 со стабилизирующими средами,с добавлением антибиотиков из расчета 500 000 ЕД пенициллина, 0,5 мг стрептомицина и 25 000 ЕД нистатина на 1 дм 3 вакцинной жидкости (ВЖ). После контакта с антибиотиками на протяжении 12 часов при плюс 4 С ассоциированную вакцинную жидкость розливали в ампулы по 2 см 3 и лиофилизировали в сублимационной установке. Продолжительность иммунитета у вакцинированных животных составляет не менее 12 мес. при иммунизирующей дозе от 500-1000 ТЦЦ 50. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ изготовления ассоциированной вакцины против чумы мелких жвачных животных и оспы овец, включающий внесение штамма вируса,культивирование,отличающийся тем,что используют штамм-45 МК вируса чумы мелких жвачных животных и штамм НИСХИ вируса оспы овец, культивирование проводят в культуре клеток тестикулы ягнят при дозе заражения 0,01 ТЦД 50/кл,длительность культивирования составляет 7 сут, при этом инфекционная активность составляет не менее 5,66 ТЦД 50/см 3, а при лиофилизации используют пептоно-лактозовые стабилизирующие добавки.