Штамм вируса болезни Ньюкасла ПМВ-1/утка/Аягуз/139/06, используемый для приготовления диагностических тест-систем

(51) 12 7/00 (2011.01) 12 1/92 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Штамм вируса болезни Ньюкасла ПМВ 1/Утка/Аягуз/139/06 обладает высокой гемагглютинирующей (11024) и антигенной активностью (титр иммунной сыворотки в РТГА 12560),характеризуется термолабильным гемагглютинином, поскольку терет способность вызывать агглютинацию эритроцитов курицы после прогревания при 56 С в течение 60 мин,репродуцируется в системе куриного эмбриона при оптимальной (37 С) температуре до инфекционного титра 7,5 ЭИД 50/0,2 мл. Штамм депонирован в коллекции микроорганизмов ДГП НИИ проблем биологической безопасности Национального центра по биотехнологии МОН РК за номером депозита 09-05/238 от 19.10.2010. Предлагаемый вариант агглютинирует эритроциты курицы, мыши, крысы,барана, осла, крупного рогатого скота. Штамм вируса болезни Ньюкасла ПМВ 1/Утка/Аягуз/139/06 может быть использован для производства диагностических препаратов,предназначенных для идентификации вновь выделенных изолятов вируса болезни Ньюкасла и обнаружения специфических антител в сыворотках крови.(72) Коротецкий Илья Сергеевич Турмагамбетова Айжан Сабиржановна Омиртаева Эльмира Сериказиевна Богоявленский Андрей Павлинович Березин Владимир Элеазарович Зайцева Ирина Алексеевна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Институт микробиологии и вирусологии Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) ШТАММ ВИРУСА БОЛЕЗНИ НЬЮКАСЛА ПМВ-1/УТКА/АЯГУЗ/139/06, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ТЕСТ-СИСТЕМ(57) Изобретение относится к области вирусологии и может быть использовано для производства диагностических препаратов, а также проведения фундаментальных молекулярно-биологических исследований. Изобретение относится к области вирусологии и может быть использовано для производства диагностических препаратов, а также проведения фундаментальных молекулярно-биологических исследований. Болезнь Ньюкасла (БН) является высоко контагиозной вирусной инфекцией птиц, которая характеризуется поражением всех внутренних органов и систем организма и вызывает крупные эпизоотии среди домашних и диких птиц. Вирус болезни Ньюкасла (ВБН) является одним из наиболее распространенных инфекционных агентов,который циркулирует практически во всех регионах мира. БН способна вызывать массовую гибель птиц в птицеводческих хозяйствах, нанося значительный экономический ущерб.,1991. Быстрое развитие птицеводческой промышленности в Казахстане, а также наличие большого числа мелких фермерских хозяйств,требует постоянного контроля за распространением ВБН и проведения регулярных мероприятий по мониторингу. Основными переносчиками ВБН являются домашние и дикие птицы. Центрально-Азиатский регион, к которому относится Республика Казахстан,по своему географическому расположению является транзитным для многих видов птиц, так как располагается на пути следования их миграционных потоков. В частности,через территорию Казахстана проходит, по меньшей мере, два миграционных русла, поэтому здесь велика вероятность заноса штаммов ВБН с перелетными птицами и их передачи домашним птицам..,2000. С момента описания ВБН в 1926 г. и до 1940 г. вспышки болезни преимущественно регистрировались вблизи Индийского океана, следовательно,вирус чаще всего поражал птиц в Юго-Восточной Азии. На территории США болезнь Ньюкасла была впервые зарегистрирована в конце 30-х годов., 1942. Высоковирулентные формы БН в 1947 г. вызвали вспышку заболевания в Англии. В конце 70-х годов на территории государства Судан от голубей был выделен агент вызывающий высококонтагиозное заболевание. Выделенный агент был отнесен к ПМВ-1. В дальнейшем наблюдалось быстрое распространение данного голубиного варианта с территории Ближнего востока в Европу, а затем и в другие страны.., 1983. Количество заболеваний ВБН в странах Европейского Союза стремительно нарастало,начиная с 90-х годов от 18 случаев в 1991 г. и 82 случаев в 1992 г. до 150-157 в 1993 и 1994 гг. соответственно Сюрин В.Н. и др., 1998. В Скандинавии в 2003 г. было выявлено заболевание ВБН. В 2004 г. в Нижегородской области России погибло более тысячи кур. Болезнь Ньюкасла была обнаружена у голубя в ноябре 2006 г. в Латвии. В августе 2007 г. в Вильяндиском уезде Эстонии было уничтожено более пяти тысяч кур инфицированных ВБН., 2007. Учитывая, что ВБН, сохраняется длительное время в воде, почве и организме птиц, существует реальная угроза существования природных резервуаров инфекции и ее распространения на территории РК и сопредельных государств Асанов Н.Г., 2007. Для предотвращения вспышек ВБН,наносящих значительный экономический ущерб птицеводству, необходимо проводить не только регулярный эпизоотологический мониторинг ВБН среди диких и домашних птиц, но и изучать эволюционную изменчивость штаммов ВБН,выделенных на территории Республики Казахстан Саятов М.Х. и др., 2003. Известен штамм-1, при вакцинации которым иммунитет вырабатывается не только у иммунизированной птицы, но и у птицы находящейся рядом и не прошедшей вакцинацию. Недостатком штамма является снижение титра инфекционности при хранении вакцины с 10-7,37 до 10-5,35 патент 2798835,., 1957. Известен штамм против ВБН Р/76/5, недостатком этого вакцинного штамма является его низкая инфекционная активность и режим инкубации при 4 С патент 4235876,., 1980. Известны мезогенные штаммы ВБНи Н их главным недостатком является способность инфицировать птицу, что ограничивает область их применения в вакцинопрофилактике патент 4053583, 1977. Вакцины полученные из лентогенных штаммовиобладают низкой иммуногенностью патент 3029190, 1962. Известен лентогенный штамм ПМВ-1 -74, недостатком которого является низкая иммуногенность патент 4279893,.,1981. Наиболее генетически родственным штаммом к выделенному изоляту является лентогенный авирулентный вакцинный штамм , который может привести к заболеванию однодневных цыплят при вакцинации патент 3548054, 1970. Таким образом, известные штаммы вируса болезни Ньюкасла обладают рядом недостатков, что ограничивает возможность их использования в ветеринарной практике. Вследствие этого, имеется необходимость выделения новых характерных для Казахстана изолятов ВБН, применяемых для использования в диагностике и вакцинопрофилактике вирусных заболеваний. Задачей изобретения является получение нового штамма ВБН - ПМВ-1/Утка/Аягуз/139/06, для его использования для приготовления диагностических тест-систем позволяющих выявлять специфические антитела в сыворотках крови птиц инфицированных ВБН, а также для проведения молекулярнобиологических исследований. В 2006 г. в городе Аягуз, Семипалатинской области из трахеального смыва клинически здоровой птицы - утки, был изолирован новый штамм ВБН ПМВ-1/Утка/Аягуз/139/06,генетически родственный с вакцинным штаммом Новый казахстанский вариант ВБН ПМВ 1/Утка/Аягуз/139/06 отличается от эталонных и выделенных ранее штаммов, обладает уникальными антигенными и биологическими характеристиками,что обеспечивает технический результат, т.к. при изготовлении диагностических тест-систем и вакцинных препаратов рекомендуется использовать актуальные для данного региона штаммы ВБН. Новый штамм депонирован в коллекции микроорганизмов ДГП НИИ проблем биологической безопасности Национального центра по биотехнологии КН МОН РК за номером депозита 09-05/238 от 19.10.2010. Адаптационные свойства. Штамм ПМВ 1/Утка/Аягуз/139/06 активно репродуцируется в системе куриного эмбриона при оптимальной (37 С) температуре до инфекционного тира 7,5 ЭИД 50/0,2 мл. Свойства агглютинации. Исследуемый штамм в среднегеометрических титрах 3-8,670,58 агглютинирует эритроциты курицы, мыши, крысы,барана, осла, крупного рогатого скота. Терморезистентность. Предлагаемый штамм обладает термолабильным гемагглютинином,поскольку теряли способность вызывать агглютинацию эритроцитов курицы после прогревания при 56 С в течение 60 мин. Элюирующая активность. По скорости элюции с эритроцитов курицы, изолят был отнесен к быстро элюирующим, так как полностью элюировал через 15-20 минут инкубации при 37 С. Патогенность. Штамм ПМВ-1/Утка/Аягуз/139/06 отнесен к непатогенному типу с интрацеребральным индексом патогенности (ИЦИП)-0 и СВГ/МЛД 104,2. Удельная активность нейраминидазы предлагаемого штамма составляет 14,3 ферментативных единиц. К выделенному штамму ПМВ 1/Утка/Аягуз/139/06 получена крысиная иммунная сыворотка. Схема иммунизации. Для иммунизации использовали крыс породы . Массой 150-200 г. Первую иммунизацию проводили подкожно в область шейных позвонков и подключичных лимфотических узлов, путем 5-7 точечных инъекций концентрированного антигена (100 мкг) в смеси с полным адъювантом Фрейнда ( ). Через 4 недели животных иммунизировали подкожно (с неполным адъювантом Фрейнда). Через 3 недели повторно иммунизировали подкожно антигеном без адъюванта. Кровь у животных брали из сердца через 7 дней после 3 иммунизации. Титр заявленного штамма в РТГА с гомологичным антигеном составлял 12560. Сопоставление нуклеотидной последовательности белка , штамма ПМВ-1/Утка/Аягуз/139/06 с нуклеотидными последовательностями белкадругих штаммов, позволило выявить эволюционное родство с вакцинными штаммамии,так же отличия в строении ДНК по сравнению с этими и другими штаммами ВБН(фигура 1). Приготовленные на основе штамма ПМВ 1/Утка/Аягуз/139/06 препараты,могут быть использованы в вирусологических лабораториях для приготовления диагностикумов при расшифровке этиологии эпидемических эпизоотических вспышек вируса болезни Ньюкасла, а также для оценки напряженности популяционного иммунитета и проведения молекулярно-генетических исследований направленных на изучение эволюционной изменчивости ВБН на территории Республики Казахстан. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм вируса болезни Ньюкасла ПМВ 1/утка/Аягуз/139/06, депонированный в коллекции микроорганизмов Научно-исследовательского института проблем биологической безопасности Национального центра по биотехнологии КН МОН РК, под номером 09-05/238, используемый для приготовления диагностических тест-систем.