Способ создания экспериментальной модели хронической надпочечниковой недостаточности у мелких лабораторных животных

(51) 61 31/573 (2010.01) 61 10/00 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Способ создания модели хронической надпочечниковой недостаточности у мелких лабораторных животных включает введение лабораторным животным лекарственного препарата,блокирующего синтез стероидных гормонов в надпочечниках, в качестве которого используют дексаметазон, который вводят внутрибрюшинно один раз в сутки в течение 1 месяца в дозе 5 мг/кг веса. Способ значительно снижает себестоимость исследования, увеличивает его доступность,избавляет от необходимости проведения оперативного удаления надпочечника для создания состояния хронического гипокортицизма, позволяет создать модель хронической надпочечниковой недостаточности у мелких лабораторных животных.(72) Джакупова Айгуль Саруаровна Маншарипова Алма Тулеуовна Абылайулы Жангентхан(56) Комиссаренко В.П. Ингибиторы коры надпочечных желез. Киев, 1972, с.375(54) СПОСОБ СОЗДАНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛИ ХРОНИЧЕСКОЙ НАДПОЧЕЧНИКОВОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ У МЕЛКИХ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к внутренним болезням и эндокринологии, и может быть использовано для создания модели хронической надпочечниковой недостаточности в эксперименте. Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к внутренним болезням и эндокринологии, и может быть использовано для создания модели хронической надпочечниковой недостаточности в эксперименте. Известен способ создания экспериментальной модели хронической надпочечниковой недостаточности, включающий адреналэктомию хирургическое удаление одного или двух надпочечников. (Лопухин Ю.М., Ноздрачев А.Д.,Багаев В.А., Поляков Е.Л. Экспериментальная хирургия лабораторных животных. Лань, 2007,.255). К недостаткам данного способа относится необходимость создания стерильных условий для проведения оперативного вмешательства, трудности его выполнения чрезбрюшинный доступ, доступ через разрез на спине вдоль края ребер, размеры надпочечников крысы составляют менее 0,50,5 см. Кроме того, к недостаткам способа можно отнести высокий риск развития острой надпочечниковой недостаточности во время операции или в после операционном периоде и как следствие высокий риск смерти лабораторных животных, а также необходимость послеоперационного ухода за лабораторными животными,включающий обработку послеоперационной раны, соблюдение теплового режима помещения, обогрев животного. Одним из главных недостатков метода является то,что удаление надпочечника у животного сопровождается утратой не только функции коркового слоя, но и мозгового слоя надпочечника. Это приводит к недостатку таких гормонов как адреналин, норадреналин. Известен способ создания модели хронической надпочечниковой недостаточности, включающий введение лабораторным животным лекарственного препарата, блокирующего синтез стероидных гормонов в надпочечниках, хлодитана (орто-, параизомера дихлордифенилдихлорэтана), что приводит к химической деструкции надпочечников. Хлодитан ингибитор функции коры надпочечников подавляет функцию кортикостероидов,вызывает деструктивные изменения нормальной и опухолевой ткани коры надпочечников. Доказано, что при введении этого препарата в дозе 25 мкг/кг лабораторным животным можно достичь развития хронической надпочечниковой недостаточности различной степени тяжести, что является неоспоримым преимуществом способа. (Комиссаренко В.П. Ингибиторы коры надпочечных желез. - Киев, 1972,375 с). Однако к недостаткам способа можно отнести тот факт, что препарат оказывает тормозящее влияние на функцию коры надпочечников у животных секретирующих гидрокортизон (собаки,кошки, обезьяны) и не проявляет аналогичной активности в опытах на кроликах, крысах и мышах,у которых основным продуктом синтеза кортикостероидов является кортикостерон. Задача изобретения - разработка способа создания экспериментальной модели хронической 2 надпочечниковой недостаточности у мелких лабораторных животных. Технический результат - способ значительно снижает себестоимость исследования, увеличивает его доступность, избавляет от необходимости проведения оперативного удаления надпочечника для создания состояния хронического гипокортицизма,позволяет создать модель хронической надпочечниковой недостаточности у мелких лабораторных животных. Указанный технический результат достигается тем, что в способе создания модели хронической надпочечниковой недостаточности, включающем введение лабораторным животным лекарственного препарата, блокирующего синтез стероидных гормонов в надпочечниках,отличительной особенностью, согласно изобретению, является то,что мелким лабораторным животным вводят препарат дексаметазон внутрибрюшинно один раз в сутки в течение 1 месяца в дозе 5 мг/кг веса. Способ основан на том, что к ингибиторам функции адренокортикотропного гипофиза относятся глюкокортикоидные препараты. Наиболее сильно подавление секреции адренокортикотропного гормона и как следствие дальнейшую атрофию коры вызывает синтетический глюкокортикоидный препарат дексаметазон. Его однократное введение экспериментальным животным в дозе 5 мг/кг веса вызывает угнетение функции адренокортикотропного гормона в течение 5-7 дней. Блокада синтеза адренокортикотропного гормона в течение месяца приводит к постепенной атрофии коры надпочечников животных и развитию хронического гипокортицизма. Эксперимент проводили следующим образом Препарат вводили самкам белых нелинейных крыс, массой 270-310 гр. Животные находились в стационарных условиях вивария при температуре 221,0 со свободным доступом к воде и пище Дексаметазон вводили однократно утром в дозе 5 мг/кг веса в течение 1 месяца. Первые симптомы дефицита гормонов коры надпочечников обнаружены к 10-12 дню исследования, что проявлялось снижением мышечной силы,двигательной активности,уменьшением потребления пищи. Учитывая, что даже однократное введение дексаметазона в дозе 5 мг/кг веса крысы резко снижает синтез кортикостерона в состоянии покоя и при условиях стресса, с этого времени животным была дополнительно назначена заместительная гормональная терапия преднизолоном. В завершении опыта животных умерщвляли после предварительного введения раствора Кетамина. Объектом исследования служили надпочечники. Проводилось взвешивание и морфометрическое исследование надпочечников. Полученные результаты были подвергнуты непараметрическому анализу с использованием критерия Манна-Уитни. Различия считали значимыми при р 0,05. Одним из критериев функциональной активности органа является его масса. После изъятия и обсушивания надпочечниковые железы были взвешены на торсионных весах. Выявлено достоверное уменьшение веса желез экспериментальной группы (0,360,02 гр против 0,300,01 г. контрольной интактной группы). Результаты исследования подтверждены данным морфологического исследования. При морфологическом исследовании ткани надпочечников животных выявлено уменьшение общей толщины коры надпочечника (Таблица 1). Таблица 1 Изменения морфологических показателей коры надпочечников экспериментальных животных Морфологический признак Интактные крысы Толщина коры надпочечника, мкр. Площадь ядра клубочкового слоя надпочечника, мкр Площадь клетки клубочкового слоя, мкр Площадь ядра пучкового слоя надпочечника, мкр Площадь клетки пучкового слоя, мкр Площадь ядра сетчатого слоя надпочечника, мкр Площадь клетки сетчатого слоя, мкр Крысы экспериментальной группы 3156,39 Значения критерия МаннаУитни эмп 22 Выявлено статистически значимое уменьшение площади клубочкового и пучкового слоев коры надпочечника. Нарушение архитектоники адренокортикоцитов проявилось нарушениями ядерно-клеточного индекса в клубочковом и пучковых слоях. Так, в клубочковом слое выявлено значительное уменьшение индекса с 61 до 21, что возможно связано со значительным снижением площади клеток клубочкового слоя. В пучковом слое выявлено уменьшение площади ядра,увеличение общей площади клетки. Увеличенные ядра большинства клеток пучкового слоя располагаются эксцентрично. В цитоплазме большое количество жировых вакуолей, что не характерно для нормального строения надпочечника. Уменьшение площади ядра пучкового слоя сопровождалось увеличением ядерно-клеточного индекса с 81 до 101. Изменения в сетчатом слое надпочечника были наименее выражены и статистически недостоверны. Таким образом, предлагаемый способ избавляет от необходимости проведения оперативного удаления надпочечника для создания состояния хронического гипокортицизма, позволяет создать модель хронической надпочечниковой недостаточности у мелких лабораторных животных. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ создания экспериментальной модели хронической надпочечниковой недостаточности у мелких лабораторных животных, включающий введение лабораторным животным лекарственного препарата, блокирующего синтез стероидных гормонов в надпочечниках, отличающийся тем,что в качестве лекарственного препарата вводят дексаметазон внутрибрюшинно один раз в сутки в течение 1 месяца в дозе 5 мг/кг веса.