Штамм бактерий Dietzia maris U2.1, используемый для очистки почвы и воды от нефти и нефтепродуктов

(51) 02 3/34 (2010.01) 09 1/10 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ ПОЧВЫ И ВОДЫ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ(57) Изобретение относится к области биотехнологии и экологии и касается получения нового штамма бактерий, который может быть использован для очистки почвенных и водных экосистем от нефти и нефтепродуктов. Штамм бактерий 2.1 используют для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. Штамм депонирован в ДГП Республиканская коллекция микроорганизмов РГП НЦБ РК КН МОН РК под номеромВ 0289. Предлагаемый штамм 2.1 активно утилизирует сырую нефть при концентрации 10 на 43,13. В полевых условиях снижает концентрацию нефти в почве на 84,43-87,35, что улучшает экологическую обстановку окружающей среды.(72) Раманкулов Ерлан Мирхайдарович Нурлыбеков Кайрат Нурлыбекович Жамангара Айжан Кашагановна Масалимов Жаксылык Кайырбекович Кулжанова Камшат Арыстановна Апендина Гульжанат Серикбаевна Туякбаева Акмарал Усерхановна Курманбаева Асылай Бактыбаевна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Национальный центр биотехнологии Республики Казахстан Комитет науки Министерства образования и науки Республики Казахстан Штамм не токсичен и не патогенен. Физиолого-биохимические признаки Образует щелочь из глюкозы, мальтозы и лактозы. Каталаза положительная,оксидаза отрицательная, уреаза отрицательная. Разжижает желатин,гидролизует крахмал,образует сероводород, ацетилметилкарбонил и нитраты, не образует индол, не дезаминирует фенилаланин. Хранят на скошенных агаризованных средах с 1 нефтью или с углеводородом при температуре 4 С. Пересев осуществляют 1 раз в 3 месяца. Растет при температуре в интервале от 15 до 37 С, оптимум температуры роста 2830 С. Штамм характеризуется высокой способностью к утилизации нефти и нефтепродуктов. Штамм бактерий 2.1 депонирован в коллекции микроорганизмов РКМ под номером 0289. Сущность изобретения поясняется следующими конкретными примерами Пример 1. Для оценки нефтеокисляющей активности культуру выращивают в минеральной среде следующего состава, г/л -10,0 431,0 К 2 НРО 4- 1,0 КН 2 РО 4 - 1,0 4 х 7 Н 2 О - 0,2 СаС 12 - 0,02 дистиллированная вода - 1.л. рН среды 7,0-7,2. Среду разливают по 100 мл в колбы объемом 250 мл и стерилизуют 30 мин. при давлении 1 атм. Суспензию бактерий получают путем смыва с поверхности скошенной среды 1 мл стерильной воды и затем вносят е в среду. В качестве единственного источника углерода используют сырую нефть. Культивируют на качалке при е скорости 180 об./мин и температуре 28-30 С в течение 14 суток. Контролем служил вариант без биомассы микроорганизмов. Остаточное количество нефти определяли гравиметрическим методом, экстрагируя остаточную нефть четыреххлористым углеродом(СС 4). Результаты исследования показали, что содержание нефти снизилось на 43,13 через 14 суток. Изменение фракционного состава остаточной нефти после внесения бактерии 2.1 проводили методом газожидкостной хроматографии. Полученные данные представлены в таблице 1. Таблица 1 Углеводородокисляющая активность штамма 2. 1 Деструкция нефти в воде за 14 суток,Наименование культуры Алифатическая Ароматическая Смолы Асфальтены Парафины Общее фракция фракция содержание нефти 1 Контроль 4,68 3,38 1,47 0,24 0,49 1 22.1 63,85 34,7 63,83 55,56 15,6 43,13 Изобретение относится к области биотехнологии и экологии и касается получения нового штамма бактерий, который может быть использован для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. Известен штамм бактерий, используемый для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов ( 2133769 С 1, кл. 12 1/20,02 3/34, В 09 С 1/10, 12 1/20, 12 11, 1999),штамм устойчив к ионам тяжелых металлов. Недостатком данного штамма является неспособность к утилизации нефти и нефтепродуктов при их высоком содержании в почве. Известен штамм бактерий для разложения нефти и нефтепродуктов( 2299239 кл. В 09 С, 02, 12, 12, 2007),штамм выделен из образца нефтезагрязненной воды с западно-сибирского месторождения. Недостатком указанного штамма является неспособность деградировать углеводороды нефти в среде со средней и высокой соленостью. Задачей изобретения является получение нового штамма бактерий,активно окисляющего нефтепродукты как в зоне контакта с водой, так и непосредственно в нефтяной пленке, способного утилизировать углеводороды нефти как в пресных,так и в засоленных экосистемах. Технический результат - биоремедиация средне и сильно загрязненных почв и воды в широком диапазоне солености. Характеристика штамма Штамм 2.1 выделен из нефтезагрязненной почвы Западно-Казахстанской области. Штамм представляет собой грамположительные кокки-палочки-кокки. Палочки размером 2-3 мкм с округленными концами расположены одиночно и в скоплениях. Рост на СПА через 72-96 часов образует инкубации колоний округлой формы, размером 23 мм, оранжевого цвета, слегка приподнятые,блестящие, с гладкой поверхностью, пастообразной консистенции и ровными краями. Аэроб. При росте на СПБ наблюдается небольшое помутнение, тонкая пленка, рост на глубине среды. Пример 2. Проводили изучение нефтеокисляющей активности культуры микроорганизмов 2.1 в полевых условиях. Объектом служил экспериментальный участок на территории Мангистауской области, тип почвы солонецсолончак. Территория была разделена на два участка первый участок был искусственно загрязнен нефтью месторождения Каражанбас, а второй - месторождения Узень. Микроорганизмы 2 вносили в количестве 1010 кл/г почвы. После внесения проводили рыхление и увлажнение. Контролем служили нефтезагрязненные участки без внесения микроорганизмов. Время культивирования 3 месяца. Остаточное количество нефти в почве определили гравиметрическим методом,экстрагируя нефть гексаном и хлороформом. Результаты исследования показали, что содержание нефти через 3 месяца снизилось на участке, 24542 загрязненной нефтью из месторождения Каражанбас, снизилось на 84,43, а на участке, загрязненной нефтью из месторождения Узень, на 87,35) через 3 месяца (таблица 2). Таблица 2 Степень деградации нефти в почве под воздействием штамма 2. 1 Содержание нефти в почве, г/кг Варианты Степень утилизации,исходное 3 месяца Контроль м.р.Каражанбас 105,1 95,45 9,182.1 137,65 21,42 84,43 Контроль м.р.Узень 98,7 80,71 18,222. 1 121,4 15,35 87,35 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм бактерий микроорганизмов НЦБ РК под номером В 0289, используемый для очистки почвы и воды от нефти и нефтепродуктов.