Штамм гриба TRICHOPHYTON SARKISOVII F-0080, подвид SARKISOVII IVAMOVA ET POLYAKOV SP.NOV., используемый для изготовления живой вакцины против трихофитии верблюдов”.

(51) 12 1/14 (2010.01) 12 1/645 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к ветеринарной микологии и может быть использовано для профилактики и лечения трихофитии верблюдов,обусловленной грибом рода . Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении культуральной биомассы гриба родас биологической активностью не менее 20 х 106 микроконидий. Штамм гриба-0080 КазНИВИ 13, подвид ,. ., используемый для изготовления живой вакцины против трихофитии верблюдов. Указанный штамм гриба-0080 КазНИВИ 13, подвид ,. ., депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО КазНИВИ.(72) Токеев Шукирбай Орынбаевич Умитжанов Мынбай Бижанов Болат Рахметович Боранбаева Райхан Султанмуратовна Арысбекова Алтынай Танибергеновна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт,ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЖИВОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ТРИХОФИТИИ 23009 Изобретение относится к ветеринарной микологии и может быть использовано для профилактики и лечения трихофитии верблюдов, обусловленной грибом рода . Известен слабовирулентный штамм гриба рода, используемый для изготовления живой вакцины против трихофитии верблюдов. Иванова Л.Г., Поляков И.Д.,. .- новый вид патогенного гриба, вызывающего дерматомикоз верблюдов.Микология и фитопатологии. -М., 1983.-Т.17.- 5.с.363-367. Недостатком указанного штамма гриба является то, что он обладает слабой иммуногеностью и изготовленная из него вакцина недостаточно эффективна. Задачей изобретения является получение штамма гриба с высокой антигенной активностью, а также пригодного для изготовления эффективной иммуногенной живой вакцины против трихофитии верблюдов. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении культуральной биомассы гриба родас биологической активностью не менее 20106 микроконидий. Штамм гриба-0080 КазНИВИ 13, подвид ,. ., используемый для изготовления живой вакцины против трихофитии верблюдов. Указанный штамм гриба-0080 КазНИВИ 13, подвид ,. ., депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО КазНИВИ. Идентификацию штамма гриба проводят по основным морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам, согласно определителя патогенных, токсигенных и вредных для человека грибов (П.Н.Кашкин, М.К.Хохряков, А.П.Кашкин.,1979 г.), а также по описанию Иванова Л.Г. Культурально-морфологические и биологические свойства возбудителя трихофитии верблюдов(1987 г). Селекция штамма. Штамм гриба-0080 КазНИВИ 13, подвид ,. ., выделен из поверхности кожного покрова больной трихофитией верблюда принадлежавшего верблюдоводческому хозяйству К/ХМес Енбекши-Казахского района Алматинской области. После очищения полученного патматериала (культуру гриба) засевали в питательную среду (сусло-агар) и ставили в термостат на 21 сут при температуре 28 С. Далее из одной колонии выращенного гриба делали повторный пересев в течение 7 этапов. Методом разведения выделяли клоны названного гриба выросших в чашки Петри на сусло-агаре, которые при дальнейшем посеве давали наибольший рост. Накопление биомассы определяли в камере Горяева по общепринятой методике. Таким образом, в результате проведенных исследований был выделен полевой изолят гриба из 2,который был более предпочтителен для дальнейшей работы. Вакцинный штамм-0380 КазНИВИ 13, подвид ,. ., получен путем направленного ступенчатого отбора по признаку спорообразования быстрорастущих колоний с активным накоплением микроконидий. Полученный штамм отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью,высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении. Штамм-0080 КазНИВИ 13, подвид ,. .,характеризуется следующими признаками. Культуральные свойства. Культуры гриба медленно растущие, рост колоний заметен в течение 24 ч после посева, на 4-5-й день начиналось образование типичных канделябров и рогов северного оленя, через 7 дней гриб разрастается по всему объему среды. Первичные культуры развивается очень медленно, к 30-му дню формируется сероватые, плоские, плотносросшиеся с субстратом и глубокими отпрысками в питательную среду колонии диаметром от 7 до 10 мм. Форма колонии ровная,бархатистая концентрическими кругами. Размер колонии достигает от 25 до 40 мм. Цвет колонии бежевый,возвышенный, бугристый, складчатый. Обратная сторона колонии окрашена в коричневый цвет. Обладает полиморфизмом. В питательную среду выделяет коричневый пигмент. Гифы разной ширины (от 1,6 до 9 мм), которая преобладают широкий неравномерно утолщенной ветвящийся мицелий. Часто можно обнаружит ветвление конечных гиф в виде рогов северного оленя. При созревании культур образуются цепочки артроспор(6-18 мкм), а затем обильные хламидоспоры (6-17 мкм). Очищенные культуры гриба на питательных средах увеличивают энергию роста и способствуют спорообразованию. Степень развития мицелия приходится на 18-21 день. Размеры макроконидий от 16 до 50 мкм, а микроконидии - значительно варьируют в размерах 2,5-5,03,0-10,0 мкм. Биохимические свойства. Штамм гриба-0080 КазНИВИ 13,подвид ,. ., не испытывают потребности в витаминах для роста и спорообразования. Никатиновая, фолиевая кислоты,тиамин, придоксин, рибофлавин, цианкобаламин не стимулируют развитие культур данного штамма. Сероводород и индол не образуют. Антигенные свойства. На введения культуры штамма в организме верблюжат, кроликов и морских свинок образуются специфические агглютинины в титрах 1 40- 11280. Маркерные признаки. Биохимические - на сусло агаре при рН 7,2-7,4 до концентрации 200-250 Макроконидии отсутствуют или млн/см 3. единичные, удлиненно-овальные. В очищенных культурах с увеличением микроконидии образуются в небольшом количестве макроконидии (размером от 16 до 50 мкм). Микроконидии единичные, 23009 значительно варьируют в размерах 2,5-5,03,0-10,0 мкм. Физиологические хемогетеротроф. По отношению к кислороду аэроб. Не обладает метаболическими свойствами. Иммунохимические - в реакциях РСК и РНГА титры антител составляет от 140 до 11280 отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью, высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении. Патогенные свойства. Штамм гриба-0080 КазНИВИ 13, подвид ,. ., патогенен для верблюдов, человека и лабораторных животных,обладают цитопатогенным действием на культуры клеток. Иммуногенность. При двукратном внутримышечном введении штамма с интервалом 14 дней в дозе 20106 микроконидий создают напряженный иммунитет у привитых верблюжат,кроликов и морских свинок к последующему заражению трихофитией с продолжительностью не менее 12 месяцев. Безвредность. Штамм гриба-0080 КазНИВИ 13, подвид ,. ., безвреден для верблюжат, кроликов и морских свинок в дозе 20 х 106 микроконидии при внутримышечном введении. Реактогенность. Штамм гриба-0080 КазНИВИ 13, подвид,. .,слабореактогенен для верблюдов при внутримышечном введении. У привитых животных спустя 2-3 недели на месте инъекции развивается специфически локализованный поверхностный очажок диаметром 1,0-2,0 см,который самопроизвольно излечивается в течение 2-х недель. Спророобразование. Максимальный уровень спорообразования на сусло-агаре 200-250 млн/см 3. Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба-0080 КазНИВИ 13, подвид ,. .,отличается от эпизоотических изолятов слабой вирулентностью, отсутствием заражения при контакте между животными, высокой активностью при внутримышечном введении животным. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба-0080 КазНИВИ 13,подвид ,. .,стабильно сохраняются на протяжении 3-4 лет при условии редких пересевов (2-3 раза в год) не ослабляет патогенные свойства. Сохраняемость в лиофильно-высушенном состоянии в присутствии 10 сахарозы и 1,5 желатина или жидкого обезжиренного молока штамм гриба-0080 КазНИВИ 13, подвид ,. ., не снижает активности при температуре 2-10 С в течение 12 месяцев в нативном состоянии в течение 6 месяцев, в замороженном при минус 40 С в течение 6 месяцев,при 20 С ниже в течение 2 года. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим раствором хлорида натрия или дистиллированной водой с рН 7,2-7,4 гриб сохраняет биологическую активность при температуре 28 С в течении 5 час, при 4 С - 3 сут. Пример. Для приготовления вакцины против трихофитии верблюдов используют 21 дневные культуры штаммов, культивированные в матрасах на сусло-агаре (рН 7,2-7,4) при температуре 28 С в течение 21 сут. Выращенную грибницу культуры в условиях асептики, снимают с поверхности питательной среды специальными скребками и помещают в стерильные банки. Грибную массу гомогенизируют в миксерах, а затем с помощью стерильной воды или физиологического раствора полученный гомогенат ресуспензируют до концентрации микроконидий 20 х 106/см 3. Ресуспензирование проводят в присутствии антибиотиков (пенициллина или стрептомицина) из расчета 100 ЕД/см 3 гомогената. К полученной суспензии грибной массы добавляют равное количество стабилизатора (рН 7,2-7,4) содержащего в дистиллированной воде 10 сахарозы и 1,5 желатина или жидкого обезжиренного молока и все тщательно перемешивают, разливают в стерильные флаконы(ампулы) и лиофильно - высушивают. Для профилактической иммунизации лиофилизированную вакцину применяют двукратно с интервалом 10-14 дней, растворяют и разводят в физиологическом растворе хлористого натрия (рН 7,2-7,4) и вводят больным двукратно с интервалом 14 дней в удвоенной профилактической дозировке. Приготовленный таким образом гомогенат из штамма-0080 КазНИВИ 13, подвид ,. .,позволяет надежно профилактировать заболеваемость поголовья верблюдов от трихофитиной инфекции. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм гриба-0080,подвид ,. ,(депонированный в коллекции ТОО КазНИВИ,под номером КазНИВИ 13), иепользуемый для изготовления живой вакцины против трихофитии верблюдов.