Способ получения моноспецифической диагностической сыворотки для идентификации вируса чумы плотоядных

(2009.01), 61 39/175 (2009.01), А 61 10/00 (2009.01), 12 7/00 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ диагностической активностью без предварительного индивидуального подбора доноров-животных. Способ получения моноспецифической диагностической сыворотки вируса болезни чумы плотоядных,включающий иммунизацию лабораторных животных вирусом болезни чумы плотоядных из штамма Доберман-2004 -0031 КазНИВИ репродуцированным в культуры клеток, получение от них крови и отделение сыворотки,в качестве вирусного штамма используют вирус болезни чумы плотоядных Доберман-2004-0031 КазНИВИ,репродуцированный перевиваемой линии клетокв течение 48 ч культивирования, при этом животных иммунизируют четырехкратно во время первой иммунизации иммуноген вводят кроликам внутримышечно в дозе 1 мл, а последующие через каждые 10 суток в дозе 2 мл в область лопатки, а затем 14 суток после последней прививки вирусом собирают кровь от доноров кроликов путем тотального обескровливания, отделяют сыворотку из полученной крови и используют в качестве целевого продукта. 1 табл.(72) Абишов Абдикалык Абдижаппарович Хайруллаева Куралай Амангелдиевна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(56) Дибиров Ш.С., Карпов Г.М., Вишняков И.Ф. Способ получения сывороток свиней против чумы плотоядных и их использование в диагностике данной болезни //Вирусные болезни с/х животных. Тезисы докладов Всероссийской научнопрактической конференции. Владимир, 1995(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОСПЕЦИФИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ВИРУСА ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ(57) Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и может быть использовано для идентификации возбудителя при диагностике болезни чумы плотоядных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении моноспецифической сыворотки для идентификации вируса болезни чумы плотоядных с достаточной 22642 Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и может быть использовано для идентификации возбудителя при диагностике болезни чумы плотоядных. Известен способ получения моноспецифической диагностической сыворотки вируса болезни чумы плотоядных, включающий иммунизацию животных вирусом болезни чумы плотоядных из штамма ЭПМ,репродуцированным культуре клеток, получение от них крови и отделение сыворотки. Дибиров Ш.С.,Карпов Г.М., Вишняков И.Ф. Способ получения сывороток свиней против чумы плотоядных и их использование в диагностике данной болезни // Вирусные болезни с/х животных. Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции Владимир, 1995 г Однако известный способ получения специфической сыворотки является трудомким. Задачей предлагаемого изобретения является повышение специфичности процесса получения моноспецифической сыворотки для идентификации вируса болезни чумы плотоядных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении моноспецифической сыворотки для идентификации вируса болезни чумы плотоядных с достаточной диагностической активностью без предварительного индивидуального подбора доноров-животных. Способ получения моноспецифической диагностической сыворотки вируса болезни чумы плотоядных,включающий иммунизацию лабораторных животных вирусом болезни чумы плотоядных из штамма Доберман-2004 -0031 КазНИВИ репродуцированным в культуры клеток, получение от них крови и отделение сыворотки,в качестве вирусного штамма используют вирус болезни чумы плотоядных Доберман-2004 0031 КазНИВИ, репродуцированный перевиваемой линии клетокв течение 48 ч культивирования,при этом животных иммунизируют четырехкратно во время первой иммунизации иммуноген вводят кроликам внутримышечно в дозе 1 мл, а последующие через каждые 10 суток в дозе 2 мл в область лопатки, а затем 14 суток после последней прививки вирусом собирают кровь от доноров кроликов путем тотального обескровливания,отделяют сыворотку из полученной крови и используют в качестве целевого продукта. Способ осуществляется следующим образом. Для приготовления моноспецифической сыворотки для идентификации вируса болезни чумы плотоядных используют штамм Доберман-2004-0031 КазНИВИ. Штамм депонирован и хранится в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов Товарищества с ограниченной ответственностью Казахский Научноисследовательский ветеринарный институт(КазНИВИ). Полученный штамм характеризуется следующими признаками. Назначение штамма штамм Доберман-2004-0031 КазНИВИ вируса чумы плотоядных обладает патогенностью по отношению естественно 2 восприимчивых животных и обладает высокой репродуктивностью в перевиваемой культуры клеток , которая способствует накоплению вирионов вируса в повышенных концентрациях в единице объема культуральной жидкости. Высокие концентрации вируса в культуральной жидкости обуславливают возможность получения из нее иммунизирующего биоматериала с высокими антигенными параметрами. Состав среды и условия культивирования для культивирования вируса и получения его биомассы используют культуру клеток 2-х суточного возраста, среда Игла, содержащий 10 сыворотки крови крупного рогатого скота и в организме 2-3 месячных интактных щенков. Морфологические признаки. Вирус чумы плотоядных относится к семействуродус липопротеидной оболочкой диаметром от 150-300 нм. Нуклеокапсид в виде единого тяжа длиной 1 мкм состоит из РНК и белковых субъединиц, уложенных в спираль, мол. масса 6104 Д. Вирионы содержат около 1 одноцепочной РНК с мол. массой 4-8106 Д, состав оснований А-20-26 Г-24-25 Ц-24-27 У-22-31. Вирус чумы плотоядных содержат 6 основных белков - , , 1 и 2 имеющих мол. массу 200000, 76000,66000, 58000, 40000 и 23000 Д соответственно. Штамм Доберман-2004 -0031 КазНИВИ вируса чумы плотоядных обладает морфологическими признаками, свойственными для возбудителя чумы плотоядных родасемейства . Культуральные свойства. Штамм Доберман 2004 -0031 КазНИВИ вируса чумы плотоядных репродуцируется и накапливается в перевиваемой культуре клетокв титре 104,5 ТЦД 50/см 3 (титр цитопатических доз,вызывающий 50 цитопатическое действие в монослое клеток). В указанной культуре клеток штамм Доберман-2004-0031 КазНИВИ размножается после двукратного перемежающего пассажа по схеме Культура клетокорганизм щенка. Выраженное цитопатическое действие вируса установлено на третьем пассаже и время репродукции в культуре клеток 8-10 суток. Антигенные свойства. Штамм Доберман-2004-0031 КазНИВИ вируса чумы плотоядных в организме инфицированных животных (собаки,кролики, овцы и козы) вызывает образование вируснейтрализующих, комплементсвязывающих и прецепитирующих антител. Патогенные свойства. Штамм Доберман-2004-0031 КазНИВИ вируса чумы плотоядных у инфицированных интактных щенков вызывает развитие клинических признаков чумы на 4-5 сутки после введения (угнетение, анарексия, повышение температуры, рвота, воспаление слизистых оболочек,диарея,пустулезный сыпь на коже),заканчивающаяся гибелью животных на 3-4 сутки после проявления симптомов инфекции. Иммуногенная свойства. Штамм Доберман 2004 -0031 КазНИВИ вируса чумы плотоядных репродуцированный в культуре клеток ,инактивированный формальдегидом и 22642 адсорбированный гидроокисью алюминия при подкожном или внутримышечном введении щенкам собак в дозе 1,0 мл способствует образованию напряженного иммунитета. При контрольном заражении все иммунизированные животные оставались клинически здоровы в течении 10 суток. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма Доберман-2004 -0031 КазНИВИ вируса чумы плотоядных, при пассировании в культуре клетоксохраняются в течение 10 пассажей (срок наблюдения). Сохраняемость. Штамм Доберман-2004 0031 КазНИВИ вируса чумы плотоядных в виде культуральной суспензии не снижает свою исходную биологическую активность при температуре 41 С в течение 40 суток (срок наблюдения), а при минус 20 С в 20-го органнотканевом суспензии - 36 месяцев. Лиофилизованный вирус в смеси со стабилизирующей средой пептон 4, сахарозу 5,сохраняет биологическую активность при температуре 41 С в течение не менее 12 месяцев,при минус 20 С- 3 года. Пример. Высокоактивную специфическую сыворотку к вирусу чумы плотоядных получают на кроликах. Используют группу животных из 9 кроликов иммунизируют внутримышечно штаммам вируса чумы плотоядных Доберман-2004 -0031 КазНИВИ, который адаптированной к перевиваемой линии клетокв дозе 1,0 см 3, а последующие через каждые 10 суток в дозе 2 мл в область лопатки. Перед каждым введением антигена осуществляют забор крови для определения уровней специфических антител. Через 14 суток после последней вакцинации животных тотально обескровливают. Полученную после отстаивания и центрифугирования крови, сыворотку инактивируют в водяной бане при 58 С в течение 30 мин и проверяют в РСК на активность и специфичность в РСК на наличие типоспецифических антител к вирусу чумы плотоядных. Результаты реакции учитывают визуально по степени задержки гемолиза эритроцитов и выражают в крестах. Предельным титром сыворотки считают ее наивысшее разведение, дающее с гомологичным антигеном, взятым в удвоенном рабочем титре (Р.Т.),задержку гемолиза на 95-100 . Результаты опыта,приведены в таблице 1. Из таблицы 1 следует, что сыворотка, полученная при гепериммунизации кроликов согласно разработанной схеме, была активна в титре 18, после второй гипериммунизации - 116, а через 14 суток после последней иммунизации активность сыворотки составил 132 с гомологичным антигеном вируса чумы и показывал отрицательные результаты с гетерологичными антигенами инфекционного гепатита и парвовирусного энтерита плотоядных. Использование штамма вируса чумы плотоядных позволит повысить диагностическую ценность антигена, изготовленного из штамма вируса чумы плотоядных Доберман-2004 -0031 КазНИВИ. Таблица 1 Оценка активности гипериммунной сыворотки к вирусу чумы плотоядных в РСК Антиген Гомологичный антиген вируса чумы плотоядных Инфекционный гепатит Парвовирусный энтерит Интервалы между введениями вакцины (сут) 21 25 14 21 25 14 21 25 14 Титры комплементсвязывающих антител 18 116 164 Титры отсутствуют Титры отсутствуют-0031 КазНИВИ,репродуцированный перевиваемой линии клетокв течение 48 ч Способ получения моноспецифической культивирования, при этом животных иммунизируют диагностической сыворотки для идентификации четырехкратно во время первой иммунизации вируса чумы плотоядных,включающий иммуноген вводят кроликам внутримышечно в дозе иммунизацию лабораторных животных вирусом из 1 мл, а последующие через каждые 10 суток в дозе штамма болезни чумы плотоядных, 2 мл в область лопатки, а затем 14 суток после репродуцированным в культуре клеток, получение от последней прививки вирусом собирают кровь от них крови и отделение сыворотки, отличающийся доноров кроликов путем тотального тем, что в качестве вирусного штамма используют обескровливания, отделяют сыворотку из полученной вирус болезни чумы плотоядных Доберман-2004 крови и используют в качестве целевого продукта. Верстка Косалиева Б.А. Корректор Болекова А.Д. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ