Способ диагностики хламидиоза овец в реакции сайдулдина

МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ испытуемой сыворотки крови путем добавления к ней хламидийного антигена, дополнительного фактора и индикаторной системы из сенсибилизированных гемолизином эритроцитов барана, учет результатов реакции, в качестве дополнительного фактора используют конглютинирующую сыворотку крови крупного рогатого скота, а учет реакции осуществляют по конглютинации эритроцитов. Техническим результатом способа является эффективное выявление хламидийных антител в сыворотках крови больных животных при помощи конглютинирующего комплекса (комплемента и конглютинина), источником которого служит сыворотка крови крупного рогатого скота,сыворотки индикаторной системы из сенсибилизированных гемолизином эритроцитов барана, при этом результаты реакции учитывают по наличию или отсутствию конглютинации эритроцитов, испытуемая сыворотка крови овец берется в разведениях 15 и 110, антиген и конглютинирующую сыворотку используют в рабочих титрах,устанавливаемых путем титрования.(72) Ильгекбаева Гульназ Дуйсековна Кадирбек Гульмира(56) Методические указания по лабораторной диагностике хламидийных инфекций у животных,утв. Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ 30.06.1999. 13-7-2/643. 7 с.21905 , 15.12.200921095 4, 15.04.2009,//(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХЛАМИДИОЗА ОВЕЦ В РЕАКЦИИ САЙДУЛДИНА(57) Изобретение относится к ветеринарии, в частности к диагностике инфекционных болезней животных и может найти широкое применение для серологической диагностики хламидиоза овец. Сущность изобретения заключается в том, что способ диагностики хламидиоза овец в реакции Сайдулдина включает серологическое исследование Изобретение относится к ветеринарии, в частности к диагностике инфекционных болезней животных и может найти широкое применение для серологической диагностики хламидиоза овец. Известен способ диагностики хламидиоза овец в реакции связывания комплемента(Методические указания по лабораторной диагностике хламидийных инфекций у животных//Утверждены Департаментом Ветеринарии России,30.06.99 г.13-7-2/643). В способе диагностики хламидиоза в РСК исследование испытуемой сыворотки крови проводится путем добавления к ней хламидийного антигена, комплемента, гемолитической системы из сенсибилизированных гемолизином эритроцитов барана, результаты учитывают по наличию или отсутствию гемолиза эритроцитов. В указанных признаках общими для реакции Сайдулдинаи РСК являются следующие в обоих случаях к смеси испытуемой сыворотки с антигеном добавляются дополнительный фактор и индикаторная система. Результаты учитывают по наличию или отсутствию реакции между дополнительным фактором и индикаторной системой. В обоих случаях индикаторной системой служат сенсибилизированные гемолизином эритроциты барана. Отличительные признаки в РСК дополнительным фактором служит комплемент морской свинки, под действием которого эритроциты в индикаторной системе гемолизируются. Вдополнительным фактором служит конглютинирующая сыворотка, которая подвергает конглютинации эритроциты в индикаторной системе. Недостатком РСК является ее недостаточная чувствительность,обусловленная низкой аффинностью комплемента морской свинки в отношении антител в сыворотке крови овец. Задачей изобретения является разработка способа диагностики хламидиоза овец в реакции Сайдулдина путем обнаружения в сыворотке крови противохламидийных антител. Сущность изобретения заключается в том, что способ диагностики хламидиоза овец в реакции Сайдулдина включает серологическое исследование испытуемой сыворотки крови путем добавления к ней хламидийного антигена, дополнительного фактора и индикаторной системы из сенсибилизированных гемолизином эритроцитов барана, учет результатов реакции, в качестве дополнительного фактора используют конглютинирующую сыворотку крови крупного рогатого скота, а учет реакции осуществляют по конглютинации эритроцитов. Способ диагностики хламидиоза овец в реакции Сайдулдина состоит в следующем. Пример 1. Реакцию ставят в пробирках в объеме 1,0 см 3. Необходимы следующие компоненты испытуемая сыворотка овец, хламидийный антиген,конглютинирующая сыворотка,хламидийная сыворотка, негативная сыворотка, гемолитическая(гемолизин),эритроциты барана,физиологический раствор. Для приготовления индикаторной системы взвесь эритроцитов и гемолитической сыворотки смешивают в равных объемах и выдерживают при 37-38 С в течение 15-20 минут. Конглютинирующую сыворотку титруют перед каждой постановкой главного опыта. Во флакон(ампулу) с сухой конглютинирующей сывороткой вносят физиологический раствор в количестве,указанном на этикетке, и растворяют ее путем легкого встряхивания. Затем готовят основное разведение сыворотки 15, для чего к 1,0 см 3 сыворотки добавляют 4,0 см 3 физиологического раствора и тщательно перемешивают. Из основного разведения в два ряда пробирок вносят пипеткой по 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30 0,35 0,40 см 3 и добавляют в каждую пробирку недостающее до 0,5 см 3 количество физиологического раствора. Затем в первый ряд пробирок вносят по 0,25 см 3 физиологического раствора, а во второй - по 0,25 см 3 хламидийного антигена в рабочем разведении. Пробирки встряхивают и помещают в водяную баню при 37 С на 30 мин, после чего во все пробирки добавляют по 0,25 см 3 индикаторной системы, встряхивают и вновь выдерживают в водяной бане при 37 С в течение 1 часа. Результаты титрования учитывают сразу после выемки штатива из бани. За титр принимают ее наименьшее количество, вызывающее полную конглютинацию эритроцитов. Рабочая доза на 2 интервала (0,1 см 3) больше. Для постановки главного опыта испытуемые сыворотки овец в разведениях 15, 15 и 110 в объеме 0,25 см 3 инактивируют в водяной бане при(60-62)С в течение 30 минут. В первую пробирку добавляют по 0,25 см 3 физиологического раствора,во вторую и третью пробирки - столько же хламидийного антигена в рабочем титре. Пробирки встряхивают и во все пробирки вносят по 0,25 см 3 конглютинирующей сыворотки в рабочем разведении и выдерживают в водяной бане 30 минут при (37-38)С. Добавляют по 0,25 см 3 индикаторной системы и выдерживают 1 час в водяной бане при(37-38)С. Одновременно с главным опытом ставят следующие контроли с позитивной хламидийной сывороткой в разведениях 15 без антигена, 15 и 110 и до предельного титра с антигеном, с негативной сывороткой в разведениях 15 без антигена, 15 и 110 с антигеном. Реакцию учитывают через один час после выдерживания при комнатной температуре. Постановку реакции считают правильной и учет результатов проводят в случае, если в пробирках с позитивной хламидийной сывороткой и антигеном взвесь эритроцитов остается гомогенной во всех разведениях до предельного титра сыворотки, а в контрольной пробирке в разведении 15 без антигена и в контроле с негативной сывороткой во всех пробирках произойдет полная конглютинация эритроцитов. Реакцию учитывают визуально по степени конглютинации эритроцитов Полная задержка конглютинации - эритроциты оседают на дно пробирки в виде пуговки и при встряхивании образуется равномерная взвесь. Частичная задержка конглютинации эритроциты оседают на дно пробирки в виде пуговки образуя слабый зонтик,при встряхивании появляются мелкие хлопья на фоне свободных эритроцитов, просветление жидкости частичное Полная конглютинация - эритроциты оседают на дно пробирки в виде зонтика, при встряхивании образуют крупные хлопья на прозрачном фоне. Диагностическая оценка результатов реакции. Полная задержка конглютинации в разведении 15 и частичная задержка конглютинации в разведениях сыворотки крови 15 и 110 при полной конглютинации в контроле без антигена оценивается как положительный результат. Частичная задержка конглютинации в разведении сыворотки крови 15 при полной конглютинации в контроле без антигена оценивается как сомнительный результат. Полная конглютинация эритроцитов как в опытных, так и в контрольной пробирках оценивается как отрицательный результат. Пример 2. Опыты проводились в хозяйствах Алматинской области на 1708 овцах. В РСК 54(3,2) сывороток крови дали положительный результат, в- 123 (7,2). Все 54 пробы, реагирующие положительно в РСК,подтвердились позитивной реакциейи дополнительно по последнему тесту выявлены 38(2,2) больных животных (таблица 1). Таким образом, техническим результатом способа явилось эффективное выявление хламидийных антител в сыворотках крови больных животных при помощи конглютинирующего комплекса(комплемента и конглютинина),источником которого служит сыворотка крови крупного рогатого скота, сыворотки индикаторной системы из сенсибилизированных гемолизином эритроцитов барана, при этом результаты реакции учитывают по наличию или отсутствию конглютинации эритроцитов, испытуемая сыворотка крови овец берется в разведениях 15 и 110, антиген и конглютинирующую сыворотку используют в рабочих титрах,устанавливаемых путем титрования. Таблица 1 Результаты серологических исследований на хламидиоз Капалинский с/о Енбекшиказахский р-н Коксуский район Балпык бийский с/о Койлык бийский с/о Всего Примечание с/о - сельский округ р-н - район доп-но - дополнительно ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ диагностики хламидиоза овец в реакции Сайдулдина,включающий серологическое исследование испытуемой сыворотки крови путем добавления к ней антигена, дополнительного фактора и индикаторной системы из сенсибилизированных гемолизином эритроцитов барана, учет результатов реакции, отличающийся тем, что используют хламидийный антиген, а в качестве дополнительного фактора применяют конглютинирующую сыворотку крови крупного рогатого скота, при этом учет реакции осуществляют по конглютинации эритроцитов.