Штамм “Р-93″ вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, используемый для получения культуральной живой вирусвакцины

КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОГАТОГО СКОТА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИВОЙ ВИРУСВАКЦИНЫ(57) Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и может быть использовано для получения культуральной живой вирусвакцины против вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота. Штамм Р-93 вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота используют для получения культуральной живой вирусвакцины. Предложенный штамм обладает высокой биологической активностью, которая достигает значения 5,5-7,51 ТЦД 50/см 3 и создает напряженный иммунитет, который сохраняется в течение 1 года обладает реактогенностью и безвредностью для организма КРС, помимо этого для получения вируссодержащей суспензии используют более дешевые культуры клеток - почка теленка (ПТ) и перевиваемой линии культуры клеток - почка коровы (МДВК).(72) Пасечников Леонид Николаевич Мамадалиев Сейдигапбар Мамадалиевич Керембекова Ултуган Жаламановна Кошеметов Жумагали Каукарбаевич Русанова Анастасия Михайловна(73) Дочернее государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научноисследовательский институт проблем биологической безопасности Республиканского государственного предприятия на праве хозяйственного ведения Национальный центр биотехнологии Республики Казахстан Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) ШТАММ Р-93 ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА КРУПНОГО 12203 Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и может быть использовано для получения культуральной живой вирусвакцины против вируса инфекционного ринотрахеита (ИРТ) крупного рогатого скота (КРС). Известен эпизоотический штамм 4016 вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (Муравьев В.Н. и др. Материалы конф.,посвящ. 70-летию МВА, 1989). Известный штамм обладает относительно низким уровнем накопления 5,251 ТЦД 50/см 3,помимо этого культивирование его в перевиваемой линии культуры клеток тестикул быка и почки теленка трудоемко и дорого. Задачей изобретения является получение штамма вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота,обладающего высокой накопляемостью в культивируемой системе и не уступающего по иммуногенности другим штаммам. Штамм Р-93 вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота используют для получения культуральной живой вирусвакцины. Штамм Р-93 вируса ИРТ, рода , семейства выделен из патологического материала от больных телят с четко выраженной клинической картиной инфекционного ринотрахеита. Дата депонирования 14.09.2000 г. Штамму присвоен регистрационный номер П 5-00/Д коллекции микроорганизмов Научноисследовательского сельскохозяйственного институтаРК. Аттенуирование штамма проводили путем последовательных пассажей методом предельных разведений вируса в культуре клеток. Культивирование штамма осуществляли на уровне 50 пассажей. Штамм Р-93 активно репродуцируется в первично-трипсинизированной культуре клеток почки теленка (ПТ) и в культуре клеток почки коровы (МДВК) при температуре 37,50,5 С и относительной влажности воздуха 555 . При этом биологическая активность вируса достигает значения 5,5 ТЦД 50/см 3 и выше. Выделенный штамм Р-93 характеризуется следующими свойствами. а) Культурально-морфологические свойства вакцинного штамма Р-93 вируса инфекционного ринотрахеита (ИРТ) крупного рогатого скота (КРС). Вирион штамма Р-93 вируса ИРТ КРС имеет размер 103 нм. Молекулярная масса полипептидов вириона составляет 260 000 Д. Штамм Р-93 вируса ИРТ КРС легко концентрируется с помощью 7 полиэтиленгликоля(ПЭГ-6000) и 27 сернокислого аммония при 4 С в течение 24 час. Вирус хорошо очищается в сахарозном градиенте плотности путем центрифугирования при 25 000 об/мин в течение 30 мин. При температуре минус 40 С вирус выживает в течение 8 месяцев, при 4 С активность вируса 2 снижается на 2 в течение 50 суток. Вирус инактивируется в течение 1,5 часа при добавлении 3 хлора. Штамм Р-93 вируса ИРТ КРС размножается в монослое первично-трипсинизированной культуры клеток почки теленка и перевиваемой линии культуры клеток почки коровы с множественностью инфицирующей дозы 0,02-0,04 ТЦД 5 о на клетку с последующим инкубированием в течение 7 суток при температуре (37,50,5)С. Активность вируса при этом достигает значения 5,5 ТЦД 50/см 3 и выше. Иммуногенные и антигенные свойства штамма Р-93 вируса ИРТ КРС. При двукратной иммунизации в дозе 2 х 105 ТЦД 50 иммунитет у крупного рогатого скота наступает на 14 сутки после иммунизации и в течение 12 месяцев предохраняет животного от заболевания ИРТ КРС. Что касается антигенных свойств штамма Р-93 вируса ИРТ КРС, на 14 сутки после иммунизации данным вирусом в организме животного накапливаются вируснейтрализующие антитела с активностью 116 и выше. б) Вакцинный штамм Р-93 вируса ИРТ КРС необходимо хранить в лиофильно высушенном состоянии со стабилизатором (2,5 пептона и 2,5 сахарозы в соотношении 11) при минус 40 С в течение 3 лет. Сведения,подтверждающие возможность осуществления изобретения Применение штамма Р-93 для приготовления вирусвакцины против вируса ИРТ КРС подтверждается разработанной нормативнотехнической документацией, включающей- Технические условия Вирусвакцина живая против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, ТУ 31 00 РК-38934366-РГКП-302001- Временная инструкция по изготовлению и контролю вирусвакцины живой против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота- Временное наставление по применению вирусвакцины живой против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота. Нормативно-техническая документация согласована с Главным Государственным ветеринарным инспектором,Директором Департамента ветеринарного надзора МСХ Республики Казахстан Ш.Ж. Турсункуловым 2001 году. Также Технические условия Вирусвакцина живая против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, ТУ 31 00 РК-38934366 РГКП-30-2001,зарегистрированы Южным филиалом РГП КазИнСт Госстандарта 022/001356, 05 декабря 2001 года. Основным потребителем данной вирусвакцины против ИРТ КРС, приготовленной на основе штамма Р-93, является Департамент ветеринарии МСХ Республики Казахстан. С 2001 по 2006 годы реализовано в Департамент ветеринарии МСХ РК около 7000 доз вирусвакцины, приготовленной на 12203 основе штамма Р-93. К данному моменту со стороны Департамента ветеринарии МСХ РК жалоб на качество вакцины не поступало. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм Р-93 вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота П 5-00/Д(НИСХИ НЦБ РК), используемый для получения культуральной живой вирусвакцины.