Способ выявления антител или антигена в крови

(51)7 01 33/53 ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(76) Кузьмин Юрий Анатольевич Кузьмин Денис Юрьевич(54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ ИЛИ АНТИГЕНА В КРОВИ(57) Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии. Способ выявления антител или антигена включает исследование биологической жидкости с помощью реакции агглютинации носителя серологически активного вещества в капиллярах с последующим учетом реакции, при этом в качестве биологической жидкости исследуют кровь и используют капилляры с размером, не превышающим размеры носителя серологически активного вещества более чем в 1,54,0 раза, при этом в один из концов капилляров вносят носитель серологически активного вещества и кровь и помещают его в 0,85 раствор хлорида натрия, обеспечивая движение крови и носителя серологически активного вещества по капиллярам,учет реакции агглютинации носителя серологически активного вещества осуществляют по задержке движения эритроцитов исследуемой крови в капиллярах. Предложенный способ позволяет повысить чувствительность реакции агглютинации в капиллярах и упростить постановку реакции. 11884 Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии. Известен способ диагностики по индикации антител или антигена в крови с помощью реакции агглютинации в капиллярах путем наслоения в капилляре на мелкую взвесь антигена исследуемой сыворотки крови с последующей фиксацией капилляра в вертикальном положении на несколько часов и учета реакции по наличии агглютинационного кольца на границе антигена и сыворотки крови ( ., ,. 1997.--,//, 69, 171-176). Существенным недостатком способа является низкая чувствительность способа и длительность проведения реакции. Существует способ диагностики по индикации антител или антигена в крови с помощью реакции агглютинации в капиллярах путем наслоения на исследуемую сыворотку крови диагностикума в виде взвеси латекса, сенсибилизированного иммуноглобулином, при значительной разнице в размерах капилляров и частиц латекса (носитель) - более чем в 500 раз, с последующим центрифугированием капилляров, а учет реакции осуществляют по наличии агглютинационных колец ( К.,., Т.. 1996.. //, 20, 21-30). Существенным недостатком способа является низкая чувствительность способа и сложность постановки реакции (требуется специальная центрифуга). Задачей изобретения является разработка способа выявления антител или антигена в крови, повышающего чувствительность реакции агглютинации в капиллярах и упрощающего постановку реакции. Способ выявления антител или антигена включает исследование биологической жидкости с помощью реакции агглютинации носителя серологически активного вещества в капиллярах с последующим учетом реакции, при этом в качестве биологической жидкости исследуют кровь и используют капилляры с размером, не превышающим размеры носителя серологически активного вещества более чем в 1,54,0 раза, при этом в один из концов капилляров вносят носитель серологически активного вещества и кровь и помещают его в 0,85 раствор хлорида натрия, обеспечивая движение крови и носителя серологически активного вещества по капиллярам,учет реакции агглютинации носителя серологически активного вещества осуществляют по задержке движения эритроцитов исследуемой крови в капиллярах. Способ осуществляется следующим образом. В один из концов капилляров вводят взвесь носителя с конъюгированным на его поверхности серологически активным веществом. Носитель, стан 2 дартизованный по размеру (им может быть латекс,эритроцит и т.д.), не должен быть меньше диаметра капилляров в 1,5-4,0 раза. В то же место вводят небольшое количество исследуемой крови. А затем этот же конец капилляров помещают в 0,85 раствор хлорида натрия, возникает отрицательное капиллярное давление и, как следствие, - движение содержимого капилляров к другому, свободному концу капилляров - результат реакции отрицательный. Если в крови есть антиген или антитела, комплементарные конъюгированному на носителе серологически активному веществу, то они взаимодействуют, образуя агглютинаты, которые, забивая капилляры скоплением аггрегировавнных клеток, блокируют движение клеток крови по капиллярам. Движение или отсутствие клеток крови и диагностикума по капиллярам хорошо видно по движению эритроцитов исследуемой крови. Способ поясняется следующим примерами. 1. Для работы берут полоску материала, состоящего из множества капилляров известного диаметра(фильтровальная бумага ) 5,0 х 0,5 см,размер капилляров которой не превышает размер носителя эхинококкового антигенного диагностикума - (частицы латекса - 1 мкм) в 1,5-4,0 раза. На бумажную полоску, отступив от ее края 1,5 см, наносят латексный эхинококковый диагностикум(0,025 мл, 0,5 ). Ближе к этому же краю полоски наносят 0,025 мл цельной исследуемой крови. Сразу же свободный от крови край бумажной полоски опускают в 0,85 раствор хлорида натрия и изучают движение содержимого капилляров по перемещению эритроцитов исследуемой крови. Капля крови сначала сливается с капли диагностикума, продвигается на 1,5-2,0 см, и красное пятно (визуализация по эритроцитам) останавливается. Движение жидкой фазы (раствор хлорида натрия и сыворотка крови) может продолжаться до другого конца полоски. Реакция положительная. В крови есть антитела к эхинококковому антигену. Если движение красного пятна продолжается до другого конца полоски - реакция считается отрицательной. 2. Для работы берут полоску из пористого материала, состоящего из множества капилляров известного диаметра 5,0 х 0,3 см, размер капилляров которой не превышает размер носителя иммуноглобулинового диагностикума для выявления С-реактивного белка (фиксированный бараний эритроцит - 7,5 мкм) в 1,5-4,0 раза. На полоску, отступив от ее края 1,5 см, наносят эритроцитарный диагностикум(0,025 мл, 0,2 ). Ближе к этому же краю полоски наносят 0,025 мл цельной исследуемой крови. Сразу же свободный от крови край полоски опускают в 0,85 раствор хлорида натрия. И изучают движение содержимого капилляров по перемещению эритроцитов исследуемой крови. Капля крови сначала сливается с каплей диагностикума, продвигается на 1,0-1,5 см, и красное пятно (визуализация по эритроцитам) останавливается. Движение жидкой 11884 фазы (раствор хлорида натрия и сыворотка крови) может продолжаться до другого конца полоски. Реакция положительная. В крови есть С-реактивный белок. Если движение красного пятна продолжается до другого конца полоски, реакция считается отрицательной. Сравнивали известный и предлагаемый способы диагностики у больных эхинококкозом и описторхозом по индикации антител. Результаты представлены в таблице. Таблица Эффективность известного и предлагаемого способов диагностики Известный Предлагаемый Положительные результаты реакции с Положительные результаты реакции с анантигенным диагностикумомтигенным диагностикумомэхинококковым описторхозным эхинококковым описторхозным Эхинококкозом 23 0 26 0(68,7 ) и используют капилляры с размером, не преПредложенный способ позволяет повысить чув- вышающим размеры носителя серологически активствительность реакции агглютинации в капиллярах ного вещества более чем в 1,5-4,0 раза, при этом в и упростить постановку реакции. один из концов капилляров вносят носитель серологически активного вещества и кровь и помещают его ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ в 0,85 раствор хлорида натрия, обеспечивая движение крови и носителя серологически активного Способ выявления антител или антигена, вклю- вещества по капиллярам, учет реакции агглютиначающий исследование биологической жидкости с ции носителя серологически активного вещества помощью реакции агглютинации носителя сероло- осуществляют по задержке движения эритроцитов гически активного вещества в капиллярах с после- исследуемой крови в капиллярах. дующим учетом реакции, отличающийся тем, что в качестве биологической жидкости исследуют кровь Больные